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背景与目的:乳腺癌是女性最常见的肿瘤之一,也是女性癌症患者的第二大死因,其发病率逐年增高,且日益年轻化,已成为中国妇女疾病负担最重的恶性肿瘤之一。乳腺癌的发生发展是一个多因素、多基因参与调控的复杂过程。近来大量研究表明p21-活化激酶4(PAK4)过表达于人类多种肿瘤组织中,在肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用,并且与肿瘤患者的较差预后密切相关。但是有关PAK4在乳腺癌发生发展中的作用及其机制研究尚未见论文报道。本研究主要通过体外细胞实验、体内成瘤实验及免疫组织化学实验,探索PAK4在乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭中的作用及可能机制,并分析PAK4与乳腺癌患者临床病理学参数及预后的关系,进而为乳腺癌的治疗提供一个新的潜在预后因子或治疗靶点。 材料和方法:本实验分别通过过表达和干扰MDA-MB-231细胞中PAK4后,采用细胞增殖实验、划痕实验、迁移及侵袭实验来研究PAK4对乳腺癌细胞的作用,采用Western Blot及实时荧光定量PCR进一步探索PAK4影响乳腺癌细胞生物学行为的机制;通过裸鼠体内成瘤实验来验证PAK4对乳腺癌生长的影响;利用免疫组织化学方法检测PAK4在93例乳腺癌组织中表达情况,应用SPSS16.0软件进行统计分析,采用卡方检验及Fisher精确检验来分析PAK4表达水平与乳腺癌患者临床病理学参数的关系;采用Kaplan-Meier生存分析法进行无病生存及总生存分析,组间比较使用log-rank检验法。P≤0.05为差异具有统计学意义。 结果: 1.过表达PAK4后,细胞增殖实验显示MDA-MB-231PAK4细胞的吸光度明显高于空载体组细胞,MDA-MB-231PAK4细胞的迁移率增加了2.5倍,侵袭率增加了1.88倍。 2.干扰PAK4后乳腺癌细胞增殖能力明显下降,细胞的迁移率及侵袭率分别降低了78%和73%。 3.过表达PAK4后,P-ERK1/2蛋白含量增加;干扰PAK4后,P-ERK1/2蛋白含量降低,MMP2mRNA水平也降低,而总ERK1/2蛋白含量一直不变。 4.裸鼠皮下成瘤实验发现接种MDA-MB-231PAK4细胞后的肿瘤体积及瘤体重量均高于对照组。 5.PAK4主要定位于乳腺癌细胞浆,PAK4的表达与诊断时患者年龄、组织学分级、ER表达、PR表达及HER2表达无相关性,肿瘤体积>2cm的胞浆PAK4高表达率为74.7%,淋巴结转移状态阳性者PAK4高表达率为84.4%,肿瘤分期为III期者,PAK4表达率越高。 6.生存分析显示胞浆高表达PAK4与患者无病生存及总生存显著相关。 结论: 1.PAK4在乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭过程中发挥着正调控作用。 2.PAK4促进乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的机制可能是通过上调ERK1/2/MAPK通路或促进MMP2的转录。 3.PAK4可以促进裸鼠乳腺癌的生长。 4.PAK4的表达与乳腺癌患者的肿瘤大小、淋巴结转移个数及肿瘤分期等乳腺癌预后因素密切相关,PAK4高表达是乳腺癌患者预后不良的重要指标。