论文部分内容阅读
根肿病是一种主要危害十字花科作物的土传性病害,对世界各地的十字花科作物都有不同程度的危害,严重威胁到十字花科蔬菜等产业的发展。根肿菌(Plasraodiophora brassicae)在植物根部呈活体寄生,其孢子抗逆性强,目前对根肿病的防治难度比较大。本实验旨在探索T1-145白菜抗、感类型之间的差异,挖掘抗病相关基因。研究获得如下结果:1、对不同白菜品种进行抗性鉴定,结果显示,T1-145对DY(大邑)菌抗病,对SF(什邡)和LJ(罗江)菌表现耐病,对XC菌表现感病,并且T1-145接种SF和LJ菌会形成球形的小瘤,是一种耐病表现;SF和LJ菌侵染T1-145形成的瘤在大小、生长位置、数量及孢子成熟度方面都有一定差异。2、采用地衣红染色法判定三种菌在早熟5号白菜上形成的肿瘤中休眠孢子的萌发情况,结果显示,XC菌形成的休眠孢子活性最高,SF次之,DY最低。XC、SF、DY菌侵染T1-145白菜的过程显示,其根毛侵染时间均为4 d,但XC菌侵染的根毛数量最多,SF次之,DY最少;皮层侵染的时间以及皮层中的游动孢囊数量具有差异,XC、SF和DY菌皮层侵染的时间分别为9 d、10 d和12 d;侵染后期在皮层中,XC菌的游动孢子囊分布比较分散,SF菌和DY菌的分布比较集中。最终XC菌侵染的T1-145白菜根部形成纺锤瘤,SF菌形成小瘤,DY菌不形成症状。通过将根肿菌次级游动孢子接种早熟5号和T1-145白菜发现,次级游动孢子能同时侵染寄主的皮层和根毛,并且侵染时间均为5 d,第12 d根毛和皮层的游动孢子囊数量进一步增多,第20 d游动孢子囊开始分散,并且T1-145白菜根内的游动孢子囊数量明显减少。3、利用高通量测序技术对T1-145白菜抗感类型的不同时期共12份材料进行测序,经过序列的过滤、组装,共获得800485764条clean reads,总clean碱基数为131.05Gb。2232个差异表达基因在SF菌侵染的材料中某些时间点表达量明显高于XC菌侵染。通过分析这些基因在SF菌和XC菌侵染材料中的表达模式,筛选出了一些抗病候选基因,包括NB-LRR抗病蛋白RML1B、CSA1、RPS6和TAO1,激酶CDPK、WAK、LecRK、RLP12和RPW8,几丁质酶,防御相关蛋白以及肿瘤抑制因子等,推测参与了T1-145对根肿菌的数量抗性,并挑选9个可能有抗性的基因。4、本研究构建了9个候选基因的重组载体,并在农杆菌AGL1的介导下转化拟南芥,经过抗生素筛选获得了转基因种子,关于它们的功能还待进一步验证。