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气相色谱法检测了青稞胚芽油脂肪酸的组成,其中不饱和脂肪酸含量占79%,油酸占17%、亚油酸占55%、亚麻酸占7.1%;另外青稞胚芽油中还含有丰富的维生素E(63.7mg/Kg)、维生素D(36.3mg/Kg)。同时论文中还探讨了青稞胚芽油软胶囊的生产工艺。 由青稞胚芽中分离出DNA结合肽,先后利用透析袋、葡聚糖凝胶G-25、葡聚糖凝胶G-15、反相高效液相色谱进行DNA结合肽的纯化;其中反相高效液相色谱分离的条件为:流动相A是0.1%三氟乙酸的水溶液,流动相B是0.1%三氯乙酸的乙腈溶液,线性梯度洗脱。 利用氨基酸组分分析仪检测DNA结合肽氨基酸残基的组成,发现DNA结合肽主要由天门冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸等残基组成,并且利用高效液色谱与质谱联用仪检测了DNA结合肽的分子量分布区间为350-1300。 通过用细胞绝对计数法和亚甲蓝比色法,分析各种分离方法得到的DNA结合肽对宫颈癌细胞(HeLa)生长的抑制作用,发现青稞胚芽DNA结合肽能够抑制HeLa细胞的生长,并且分离得到抑制活性最强的组分DBP2。另外通过用磷酸钙介导DNA结合肽培养HeLa细胞,能够增强DNA结合肽的抑制活性,表明DNA结合肽能够进入到HeLa细胞内部,参与HeLa细胞生命周期的调控。 细胞周期蛋白依赖性激酶7(CDK7)是DNA转录起始的关键激酶,负责磷酸化RNA聚合酶Ⅱ(RNAPⅡ)的C-末端,通过RT-PCR扩增的方法,检测到用DNA结合肽作为外源物质培养HeLa细胞时,CDK7的mRNA表达水平有明显理降;利用CDK7抗原免疫化学染色和蛋白质印迹法发现DNA结合肽能明显下调细胞内CDK7蛋白的表达量;同时利用激光共聚焦扫描显微镜观测到,DNA结合肽处理HeLa细胞时,细胞核内CDK7的表达量明显减少。实验结果表明,DNA结合肽可能通过影响CDK7蛋白的表达,来调控HeLa细胞的生长周期。 通过蛋白质印迹的方法,发现DNA结合肽下调细胞外信号调节性激酶(ERK1/2)的表达,并且通过检测细胞内pERK1/2蛋白的表达量,发现DNA结合肽抑制ERK1/2的活性。通过核受体NF κBp65抗原免疫化学染色法、蛋白质印迹法发现DNA结合肽能够明显的抑制细胞内NF κBp65蛋白的表达。另外我们通过激光共聚焦扫描显微镜的观察发观,在HeLa细胞内NFκBp65广泛的分布在细胞质核细胞核内,并且大量的分布在细胞核内。 实验中还探讨了三种依据RNAPⅡ的C-末端(CTD)合成的三种肽片段,对HeLa细胞的影响,发现含有三个Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser重复序列的肽片段(合成肽链C)尽管对细胞内CDK7的mRNA表达水平没有明显影响,但能够激活细胞内CDK7蛋白的表达量。另外合成肽链C能激活ERK1/2的表达,但对NFκ Bp65的表达几乎没有影响,而另两条肽链A利B对HeLa细胞内CDK7、ERK1/2、NFxBp65蛋白的表达几乎没有影响。