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目的:肺癌是胸外科的常见疾病,发病率和死亡率在世界范围内都位于前列。由于缺乏特异的临床症状和肿瘤标记物,肺癌的早期诊断困难,总体治疗效果较差,已成为严重威胁健康的的疾病。血管内皮生长因子(VEGF)是血小板衍生因子(PDGF)超基因家族成员之一,是一种胞浆分泌蛋白。现有研究结果表明,VEGF在非小细胞肺癌细胞和组织中高表达,促进血管上皮细胞及淋巴管上皮细胞的增殖和分裂,在肺癌发展和转移过程中起到了关键作用。也有研究观察到,VEGF对肺癌细胞的自分泌作用,可能促进肿瘤的生长增殖,但是具体的作用机制还不清楚,相关的研究也还很少。本研究旨在从基因合成环节入手,通过用VEGF的反义寡核苷酸转染体外无血管环境培养的非小细胞肺癌细胞系A549,观察反义寡核苷酸(ASODN)脂质体转染的效果,进一步研究VEGF反义寡核苷酸对细胞中VEGF的抑制作用和抑制表达后对细胞生物学特性的影响,以初步揭示VEGF自分泌与旁分泌对肺癌细胞的不同影响,阐明其潜在的治疗价值。方法:体外培养非小细胞肺癌细胞系A549,并用荧光标记的VEGF反义寡核苷酸以不同方式转染A549,用荧光显微镜观察转染效果。再用五种不同方式转染A549细胞,分为五组:实验组以反义寡核苷酸(ASODN)转染细胞,两个核苷酸对照组分别以正义寡核苷酸(SODN)和错义寡核苷酸(MODN)转染细胞,两个空白对照组为脂质体(Lipofectamine)空转染组和培养基对照组。用RT-PCR与ELISA方法检测不同方式转染后A549VEGF mRNA与VEGF蛋白表达情况的变化;用MTT法观察不同组细胞的生长存活情况;流式细胞仪检测不同组细胞周期的变化。结果:(1) VEGF反义寡核苷酸(ASODN)用脂质体转染24h后,可以获得85%以上的转染效率,而不加脂质体的寡核苷酸组仅有5%左右的转染效率;(2)实验组转染ASODN24h、48h后,细胞中VEGF mRNA显著低于其余四个对照组(P<0.05);(3) ASODN转染组细胞的VEGF蛋白含量在24h、48h、72h相比其余四个对照组均有明显降低(P<0.001)。两个核苷酸对照组的VEGF蛋白的表达与两个空白对照组相比也有降低(P<0.05);脂质体空转染组与培养基组相比无明显差异(P>0.05)。(4)在导入核苷酸后的第1天,ASODN组的肺癌细胞存活数明显低于四个对照组,(P<0.05),第2天以后与两个核苷酸对照组相比差异不明显,与脂质体组和培养基组的差异依然显著(P<0.01)。(5)转染24h后,ASODN组G2期细胞数显著低于其余四组。结论:(1) ASODN与脂质体共转染方式可以被肺癌细胞高效率摄取,并能在细胞核和细胞质之间内获得高效率的扩散。(2)反义VEGF寡核苷酸可以有效抑制非小细胞肺癌A549细胞VEGF mRNA和蛋白的表达。(3)在没有血管和内皮细胞因素的参与下,抑制肺癌细胞内源性VEGF的表达可以抑制细胞的生长和增殖。正义VEGF寡核苷酸与错义VEGF寡核苷酸也可以在一定程度上抑制A549细胞的生长和增殖。(4)通过抑制VEGF表达可以阻滞肺癌细胞周期于G1/S期。(5)VEGF反义寡核苷酸脂质体共转染方式可以特异高效地从基因层面降低肺癌VEGF的表达,抑制细胞生长,具有临床应用前景。(6)非小细胞肺癌VEGF自分泌与远距内分泌对肿瘤细胞的生长具有不同影响,进一步区分有可能能更特异地阻断肿瘤发展过程中的关键环节,以减少治疗中所发生的副作用。