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CD81是tetraspanins蛋白超家族的成员之一,与细胞间接触的稳定和细胞有丝分裂活性的调节密切相关,但由于发现较晚、作用机制也尚未明确,这个分子近期才引起研究者的关注。本研究的目的是观察CD81在正常、脱离和再复位大鼠视网膜上的表达,以及抗CD81抗体对培养大鼠视网膜神经胶质细胞和色素上皮细胞增殖性的影响。 本研究共分为三部分:第一部分,是观察CD81在正常大鼠视网膜上的表达。我们应用抗CD81抗体EAT2对正常大鼠的视网膜组织冰冻切片进行免疫组化染色,发现其神经节细胞层、内丛状层和外丛状层呈网状致密染色,视网膜色素上皮细胞膜表面也有CD81的阳性染色;应用抗CD81抗体H121对神经视网膜和视网膜色素上皮层进行Westernblot分析,进一步证实二者都能表达CD81。此后我们又进行了视网膜神经胶质细胞和色素上皮细胞的体外培养,免疫组化染色结果表明,这两种细胞都能表达CD81。第二部分,我们借助MTT法观察抗CD81抗体EAT2和H121对培养大鼠视网膜神经胶质细胞和色素上皮细胞增殖活性的影响,结果显示:抗CD81抗体可以抑制这两种细胞的增殖活性,EAT2对视网膜色素上皮细胞的细胞生长抑制率达72.7%,H121对视网膜神经胶质细胞的细胞生长抑制率也可达50.37%。抑制作用的强弱随抗体种类、抗体浓度及所作用细胞种类的不同而不同。第三部分中,我们经巩膜在大鼠视网膜下注射0.7%透明质酸钠,并在7天后通过巩膜切口放出视网膜下腔的透明质酸钠,制作了视网膜脱离和再复位的动物模型,应用免疫组化染色结合流式细胞术,检测在视网膜脱离及再复位过程中CD81表达的变化,结果显示:网脱后,神经视网膜层和色素上皮层的中国人民解放军总医院中国人民解放军军医进修学院博士学位论文摘要CD81表达上调,网脱第7天达高峰,第28天恢复至接近正常水平。同时我们用流式细胞仪观察了网脱后视网膜细胞的增殖活性,发现网脱后神经视网膜层和色素上皮层细胞的增殖活性都有一个增强的过程,其时相变化与CD81表达水平的变化基本一致。而视网膜再复位后,其CD81表达水平和细胞增殖活性都较同期未复位者下降,但前者的下降迟于后者。 通过本研究,我们证明:正常大鼠的视网膜可以表达CD81,视网膜的神经胶质细胞和色素上皮细胞可能是表达CD81的主要细胞类型。在体外培养条件下,CD81与视网膜神经胶质细胞和色素上皮细胞的增殖抑制密切相关。另外,我们还首次观察到,视网膜脱离后神经视网膜和RPE的CD81表达可以上调,而且随网脱时间的延长或通过视网膜的再复位CD81的表达可以趋于恢复正常。我们推测:在视网膜脱离及再复位过程中,CD81可能通过接触性抑制机制对视网膜神经胶质细胞和色素上皮细胞的增殖进行调控。