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甜菜是世界上重要的糖料作物,但生产中甜菜病害较多,其产量和品质受到严重威胁。改变植物性状表现,转基因是最直接有效的手段。近年来,人们开始尝试通过遗传转化有目的地将抗病基因导入甜菜品种,从中选育抗病、丰产、优质的甜菜新品种。虽然国内外这方面的研究较多,但所取得的成效却甚微,其主要原因是甜菜再生较为困难,遗传转化体系基因依赖性强。植物遗传转化方法有很多,农杆菌介导法由于其可以转入的片段长,拷贝数少,遗传稳定性好等优点,一直是科学研究者重点研究的方法。前人的研究结果表明,核糖体失活蛋白(RIPs)具有抗病毒、真菌、细菌等多种抗性。本研究是通过PCR法,将玉米(Zea mays)RIPs基因克隆出来,构建重组质粒,利用农杆菌法将目的基因导入甜菜,并在已建立的甜菜再生体系基础上,对农杆菌介导的转化条件进行了优化,建立了稳定的甜菜子叶节遗传转化体系,获得转RIPs基因的甜菜植株,为甜菜抗病分子育种提供了基础材料和理论依据。目前取得的主要研究结果如下:1、利用PCR方法从玉米幼苗叶片总DNA中克隆到RIPs基因,并进行序列测定。该基因全长953bp,与文献报道的核苷酸序列具有99.90%的同源性,氨基酸同源性为100%;2、通过pMD18-T Vector这一克隆载体的介导,将RIPs基因与质粒pCAMBIA2301相连,构建了以CaMV35S为启动子,以Tnos为终止子的植物双元表达载体,该载体含有npt II选择标记基因。3、优化了农杆菌介导的甜菜子叶节遗传转化体系,结果显示:将对数生长期的农杆菌重悬稀释后调浓度OD600值为0.4,子叶节外植体经过24h预培养,侵染时间8min,共培养培养基中添加100μM乙酰丁香酮,22℃～25℃共培养48～60h,经过Cb抑菌和125mg/L的Kan筛选,有利于甜菜子叶节的遗传转化。可得到最高的抗性芽率。4、用液氮冷冻法将重组质粒转入农杆菌LBA4404,实现了核糖体失活蛋白(RIPs)基因对甜菜的遗传转化,共获得抗性植株38株,PCR检测的阳性植株11株,阳性植株比率为28.9%。本研究进一步的相关工作正在进行中。