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肝脏是鸡脂质代谢的主要器官,特别是产蛋高峰期鸡,肝脏大量合成脂质并转运至发育中的卵母细胞形成蛋黄。为了研究鸡脂质代谢调控的分子机制,课题组对产蛋前期(20周龄)和产蛋高峰期(30周龄)卢氏绿壳蛋鸡肝脏组织进行了转录组分析,本研究通过对转录组数据的深入挖掘,鉴定出91个在产蛋高峰期鸡肝脏组织中表达水平显著上调的新基因,通过对这些基因进行结构和功能预测,发现其中5个基因具有共同的NADP结合位点,属于NADB-Rossmann超家族,分别命名为NADB-LER1-5。在此基础上,利用生物信息学分析手段,结合分子生物学研究技术,阐明了鸡NADB-LER1-5基因家族的表达调控机制,为进一步研究NADB-LER1-5基因家族在鸡的生物学功能中奠定了基础。主要研究内容和结果如下:1、通过对产蛋前期与产蛋高峰期鸡肝脏转录组数据的深入分析,筛选获得5个在产蛋高峰期显著上调,均具有NADP结合位点且未注释的基因,属于NADB-Rossmann超家族,因此命名为NADB-LER1-5。以Ensbmel中预测的基因序列为参考序列,设计PCR引物,克隆获得了NADB-LER1-5基因的CDS序列。生物信息学分析表明,NADB-LER1-5基因CDS区全长分别为780 bp、762bp、780 bp、780 bp、771 bp;分别可编码259、253、259、259、256个氨基酸残基。利用NADB-LER1-5氨基酸序列构建了NADB-LER1-5基因家族进化树,为这一新基因家族功能研究奠定了基础。2、利用实时荧光定量PCR(qPCR)技术分析了产蛋前期(10周龄)和产蛋高峰期(30周龄)卢氏鸡NADB-LER1-5基因的组织表达模式,并检测了NADB-LER1-5基因在1日龄、1周龄、10周龄、15周龄、20周龄、30周龄以及35周龄卢氏鸡特定组织的表达变化。结果显示,NADB-LER1-5基因具有广泛表达的特性。NADB-LER1-4基因在脂质代谢旺盛的器官(肝脏、肾脏、十二指肠)中表达水平较高,而NADB-LER5基因除在肝脏、肾脏表达水平较高外,在心脏、胸肌和胰腺中表达水平也较高;与10周龄鸡相比,30周龄鸡NADB-LER1-4基因的表达在肝脏中呈现上调趋势,在肾脏中呈现下调趋势,在十二指肠中没有变化,而NADB-LER5基因的表达在肝脏、心脏和胸肌中呈现上调趋势,而在肾脏和胰脏中呈现下调趋势。进一步对NADB-LER1-5基因在不同发育时期肝脏组织中的表达规律研究发现,其在性成熟时期的表达水平显著升高(P<0.05),表明,NADB-LER1-5基因可能与肝脏脂质代谢或直接与产蛋性能相关,同时推测NADB-LER1-5基因的表达可能受到鸡体内雌激素的调控。3、以雌激素处理的青年母鸡以及鸡胚肝脏原代细胞为模型,分析不同处理条件下NADB-LER1-5基因的表达变化规律,结果显示,雌激素处理能够显著上调NADB-LER1-5基因在肝脏组织和体外培养的肝脏原代细胞中的表达水平(P<0.05),表明NADB-LER1-5基因的表达受雌激素调控,可能参与雌激素诱导的脂质代谢过程。4、为了进一步研究雌激素调控鸡NADB-LER1-5基因表达的分子机制,用17β-雌二醇分别与雌激素受体拮抗剂MPP(ERα的高度选择性拮抗剂)、ICI 182,780和tamoxifen(ERα和ERβ受体的拮抗剂,且有兴奋GPR30的作用)共处理鸡胚肝脏原代细胞,结果显示,MPP可完全拮抗17β-雌二醇的作用,而ICI182,780和Tamoxifen却对17β-雌二醇的作用不具拮抗作用,表明,雌激素对NADB-LER1-5基因表达的调控是通过ERα受体实现的。