论文部分内容阅读
猪圆环病毒病是由猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type2, PCV2)引起的单独或继发/混合感染其他致病微生物的一系列疾病的总称。包括断奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaning multisystemic wasting syndrome, PMWS)、猪皮炎与肾病综合征((porcine dermatitis and nephropathy syndrome, PDNS)、新生仔猪先天性震颤(congenital tremors-ALL, CT-ALL)、猪增生性坏死性肺炎(proliferative and necrotizing pneumonia, PNP)、增生性坏死性肠炎(proliferative and necrotizing enterocolitis)以及怀孕母猪的繁殖障碍(reproductive failure)等。1991年加拿大首次爆发本病,随后,世界各养猪国家和地区都有本病报道。我国由郎洪武2001年首次报道,目前该病在我国猪群中广泛流行,给养猪业带来巨大的经济经济损失。2010年冬以来,哺乳仔猪病毒性腹泻在我国很多省份出现较大范围的流行,并导致发病猪场的高死亡率(30%～100%),给我国当前养猪业造成了严重的经济损失,PCV2、TGEV、PEDV和GAR(轮状病毒A群)四种病毒在临床上是比较常见的引起仔猪腹泻的病毒,它们常常单纯或混合感染,并且流行性腹泻因为PCV2的垂直传播而变得易发和更加严重。本文从我国东南地区猪圆环病毒的血清学调查、分子流行病学调查两个方面研究了我国东南地区猪圆环病毒的流行和毒株变异情况,同时,建立并初步应用PCV2、TGEV、PEDV和GAR复合PCR快速诊断方法,研究了我国东南地区仔猪腹泻病原的流行情况。本研究具体内容如下：1.2008～2012年我国东南部分地区猪圆环病毒2型血清学调查对2008～2012年间我国东南部分地区(江苏、安徽、山东、江西和上海等)120个规模化猪场的2626份血样(其中1990份未免疫商品化PCV2疫苗,636份免疫过商品化PCV2疫苗)进行猪圆环病毒血清抗体检测,并进行了流行病学分析。结果显示：未免疫商品化猪圆环病毒疫苗的1990份血样总体阳性率为71.21%(1417/1990),2008～2012年PCV2抗体阳性率分别为53.40%,35.33%,80.63%,86.37%和78.43%,5年间PCV2抗体阳性率呈现出一个先下降后上升,然后平稳在一个较高水平的趋势,但整体趋势是上升的。春夏秋冬四季阳性率分别为80.94%,68.02%,68.63%和55.79%,说明猪圆环病毒感染一年四季均有发生,但在冬春季更易发生。未免疫商品化PCV2疫苗的猪群中,保育猪PCV2抗体阳性率最低为58.33%,经产母猪最高为90.61%,仔猪和肥猪阳性率相近,分别为81.51%和74.12%,说明仔猪断奶后随母源抗体下降其抗体阳性率亦下降,但随猪龄的增长而感染逐渐加重后其抗体阳性率又升高。免疫PCV2疫苗的各个生长阶段的猪群,其PCV2抗体阳性率均显著高于未免疫商品化PCV2疫苗的相应阶段的猪群,尤其在保育阶段,说明市售PCV2商品化疫苗能诱导产生较高PCV2抗体。2.我国东南地区猪圆环病毒2型分子流行病学调查及基因序列分析应用PCR方法对2010～2012年我国东南部分省市送检的441份发病猪肺脏、淋巴结样品进行PCV2检测,同时将37株测定的PCV2全基因序列和GenBank上15株2009-2012年我国东南地区PCV2全基因序列进行遗传进化分析,结果显示,组织病料中PCV2总阳性率为38.10%(168/441),其中安徽为48.31%(43/89),江苏为36.95%(109/295),2010～2012年PCV2阳性率分别为：35.77%(49/137)、54.17%(65/120)、29.34%(54/184)；PCV2全基因遗传进化分析与ORF2基因遗传进化分析结果相似,其中我国东南52株PCV2全基因序列有3株PCV2a,49株PCV2b (40株1C,9株1A/1B),说明2009年以来我国东南地区猪圆环病毒二型以PCV2b(1C)占主导。对50株PCV2ORF2编码氨基酸序列比对分析表明PCV2基因亚型具有其特异的氨基酸变异位点,本研究测定的3个序列的ORF2氨基酸序列分析发现,它们有独特的变异位点或片段S47, L80, FPKS130-133, NR(K)I185-187, K191等,属于PCV2a里的一个新亚群。3. PCV2、PEDV、TGEV和GAR复合PCR方法的建立及应用建立了一种新的可以同时检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV、猪轮状病毒A群(GAR)和猪圆环病毒(PCV2)4种腹泻相关病毒的复合PCR方法,对4种病毒的阳性质粒检测中,复合PCR能分别检测到1.74×104拷贝/μ L的pMD19-T-TGEV,2.1×103拷贝/μ L的pMD19-T-PEDV,2.17×106拷贝/μL的pMD19-T-PCV2,1.26×104拷贝/μL的pMD19-T-GAR,对安徽和江苏的144份腹泻粪便(肠内容物)检测,结果显示PEDV、PCV2、TGEV和GAR阳性率分别为50.00%、22.22%、11.11%和8.3%。与单项PCR的符合率达到了98.63%以上,再次表明了该复合PCR检测方法具有较高的敏感性。该方法特异性强,敏感性高,省时省力,完全可以应用于临床疾病的快速诊断中。