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背景糖皮质激素既是机体重要的生理物质,又是广泛应用于临床的免疫抑制剂[1,2],而地塞米松(Dexamethasone,Dex)是一种人工合成的糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)。糖皮质激素受体(Glucocorticoid Receptor,GR)是一种激素依赖的转录调节因子,是核受体超家族的成员。研究发现GR广泛表达于外周和中枢神经系统[3]。研究发现伤害性信息的传递以及病理性疼痛时中枢痛觉敏化的产生和发展与GR表达关系密切[4-6]。神经病理性疼痛是由神经损伤导致的一类慢性痛,肿瘤造成的骨压缩、感染、自身免疫疾病、创伤和糖尿病等均可引起的此类疼痛[7]。除了自发痛和痛觉过敏的症状之外,它还可以诱发机体对正常无害刺激产生痛觉超敏,即触诱发痛[8,9]。研究者已开始逐渐认识到神经病理性疼痛并不单纯是一种症状,而是神经系统功能紊乱所导致的一个综合后果[10,11]。因此,探索其痛觉敏化产生的机制对神经病理性疼痛的治疗显得尤为重要。近年研究显示,在外周神经损伤模型、癌痛模型以及外周炎性痛模型中,均可观察到位于脊髓背角的胶质细胞不同程度的活化[12-14]。研究表明胶质细胞在神经病理性疼痛中具有重要作用,是中枢痛敏发生和维持的关键性因素[15]。研究发现,作为丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated Protein Kinases,MAPK)信号通路家族中的一员,p38MAPK在多种神经病理性疼痛过程中的活化位置特异性出现在小胶质细胞上[16]。诸多证据表明脊髓小胶质细胞p38MAPK的活化与神经病理性疼痛的发展有着密切联系[17-19]。地塞米松具有调节外周免疫反应及对脑组织的抗炎作用,而小胶质细胞也在脑组织的免疫及炎症反应过程中发挥着重要的作用[20]。小胶质细胞在脊髓背角的增生影响神经病理性痛过程中神经敏化的形成[21],在体外糖皮质激素能够影响BV-2小胶质细胞的增殖和活化[22]。但在体内,糖皮质激素能否通过调节小胶质细胞中p38MAPK信号通路从而影响神经病理性痛过程中枢痛敏的形成还未可知。目的建立SNI大鼠模型,检测地塞米松和p38抑制剂sb203580给药前后SNI大鼠机械痛阈的变化,检测疼痛炎症因子IL-6释放的改变,GR和磷酸化p38蛋白表达的变化,证明地塞米松对SNI大鼠神经病理性疼痛的影响可能是介导p38MAPK信号通路实现的,并在原代小胶质细胞中,给予地塞米松与sb203580观察GR、磷酸化p38表达和小胶质细胞活性之间的关系,从而探讨地塞米松对SNI模型大鼠的镇痛效应及可能机制。材料和方法1.分组:动物实验中,将大鼠随机分为分为9组:正常组(Naive组,n=10),模型组(SNI组,n=10),假手术组(Sham组,n=10),地塞米松单纯注药组(D ex组,n=10),地塞米松处理组(SNI+Dex组,n=10),生理盐水处理组(SNI+NS组,n=10),SB203580单纯注药组(sb203580组,n=10),SB203580处理组(S NI+sb203580组,n=10),SB23580溶质二甲基亚砜组(SNI+DMSO组,n=10);细胞实验中,将细胞分为5组:DPBS组(n=4),谷氨酸组(GLU组,n=4),地塞米松处理组(GLU+Dex组,n=4),DMSO处理组(GLU+DMSO组,n=4),SB处理组(GLU+sb203580组,n=4)。2.SNI模型建立:Sham组只暴露坐骨神经及其分支但不结扎。模型组切开大鼠后肢皮肤后,充分暴露坐骨神经及其分支,选择性结扎并剪断腓总神经和胫神经。3.蛛网膜下腔置管:在L5-L6间隙穿刺,大鼠出现甩尾、抖动反射时,将PE10导管前端向上置入,导管内有清亮的脑脊液流出或大鼠出现甩尾反射,提示蛛网膜下腔置管成功。4.机械痛阈测定:采用Von frey丝测定大鼠50%缩足阈值。5.蛋白印记检测(Western-blot):检测Sham组与SNI组大鼠3天、7天、14天、21天脊髓GR蛋白及磷酸化p38的表达,及其余各组7天脊髓GR蛋白及磷酸化p38的表达情况。6.酶联免疫吸附检测(ELisa):检测各组大鼠7天血清IL-6蛋白的含量。7.原代小胶质细胞培养:原代培养脊髓胶质细胞后进行小胶质细胞分离纯化并鉴定。8.细胞免疫荧光化学检测:检测各组细胞GR及CD11b/c的蛋白表达荧光强度。结果1.大鼠机械痛阈结果显示:SNI组大鼠术后7天、14天、21天和28天的50%缩足阈值显著降低(P<0.05);建模早期蛛网膜下腔注射Dex后,SNI+Dex组大鼠术后7天术侧50%缩足阈值显著升高(P<0.05);后期注射Dex,SNI+Dex组大鼠10天、11天、12天术侧50%缩足阈值升高(P<0.05);SNI+sb203580组大鼠7天、9天、11天大鼠50%缩足阈值升高(P<0.05)。2.Western-blot结果显示:SNI组术后7天、14天21天GR表达降低,伴随术后3天、7天磷酸化p38的表达水平升高(P<0.05);SNI+Dex组大鼠脊髓GR表达水平提高,而p38磷酸化水平显著降低(P<0.05);SNI+sb203580组脊髓磷酸化p38表达水平显著降低(P<0.05)但GR表达变化无统计学意义(P>0.05)。3.Elisa结果显示:同Sham组相比,SNI组大鼠血清IL-6蛋白含量显著升高(P<0.05);同SNI组相比,SNI+Dex组与SNI+sb203580组大鼠血清IL-6含量均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。4.细胞免疫荧光结果显示:GLU组小胶质细胞突起缩短,形态变圆,呈阿米巴样,但GLU+Dex组小胶质细胞形态为细长分支状;GLU组小胶质细胞中CD11b/c的荧光强度显著提高(P<0.05),GLU+Dex组GR荧光强度提高,而小胶质细胞中CD11b/c强度下降;GLU+sb203580组细胞CD11b/c荧光强度显著下降(P<0.05)。结论地塞米松对SNI模型大鼠早期机械痛敏的抑制作用可通过介导小胶质细胞中的p38MAPK信号蛋白实现。