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共轭亚油酸（conjugated linoleic acids，CLA）是一组天然存在的具有18个碳原子，含有共轭双键的多不饱和脂肪酸，是必需脂肪酸-亚油酸（Hnoleic acid，LA）的异构体。CLA有多种生理功能，包括抗肿瘤、抗动脉粥样硬化、抗糖尿病、抗氧化、抑制体内脂肪积累和促进生长等作用。除此之外，CLA还可以调节免疫系统功能、抑制血栓的形成、调节脂类代谢以及基因表达等。 丝裂原激活蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases，MAPKs）途径是生物体内重要的信号转导系统之一，普遍存在于哺乳动物细胞中。细胞外信号调节蛋白激酶（extracellular-signal regulated protein kinase，ERK）是MAPK家族中研究得最为清楚的成员，其信号转导通路Ras-Raf-MEK-ERK参与细胞生长、发育、分裂及分化等多种细胞过程。 细胞周期是细胞生命活动的基本过程，包括G1、S、G2、M四期。参与细胞周期调控的蛋白主要有：细胞周期蛋白（Cyclin）、细胞周期蛋白依赖性激酶（Cyclin-dependent kinase，CDK）、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子（Cyclin-dependent kinase inhibitor，CKI）。CyclinD1是G1期发挥最主要作用的细胞周期蛋白，它的表达降低，使细胞不能通过G1→S期的限制点，将细胞阻滞于G1期。P27是一种CKI，它能抑制不同类型Cyclin与CDK的结合或复合物的激活，阻碍细胞由G1期进入S期。 从20世纪70年代起，原为乳腺癌低发区的亚洲国家乳腺癌发病率逐第四军医大学祠眨士学位论文年升高，在我国特别是发达地区已成为危害妇女健康的主要恶性肿瘤。 本实验以乳腺癌细胞系SKBr3为研究对象，通过比较CLA和LA对细胞生长及细胞周期的影响，探讨在此过程中，ERK信号转导通路、cychn、cKI活性表达的特点，为进一步探讨CLA的抗肿瘤机制提供实验依据;同时也为人们通过摄入富含CLA的食物，或通过提取有效成分制备成药物预防和治疗肿瘤提供理论基础。实验方法 本实验分为对照组、CLA（50、1 00、200娜。巩）和LA(50、1 00、200脚ol助7个作用组。体外培养乳腺癌细胞系SKBr3细胞，采用不同浓度（50、100、200脚01几）CLA和LA连续作用于sKBr3细胞sd后，通过细胞计数法绘制生长曲线和进行M竹比色实验，观察CLA和LA对细胞生长的影响;在光学显微镜及透射电镜下观察细胞形态学变化;流式细胞仪检测细胞周期分布的变化;研触stem杂交分别检测CLA和LA对 ERK及p一ERK活性的影响;Westem杂交检测CLA和LA对细胞周期控制蛋白CyclinDI和p27表达的影响。实验结果 细胞生长曲线显示:50、100、200娜。讥CLA浓度组作用细胞sd后抑制率分别为75.0%、57.9%、33.1%（P<0 .05）;LA各浓度组作用细胞5d后抑制率分别为38.4%、25.4%、10，1%（P<0 .05）。CLA对sKBr3细胞增殖有明显的抑制作用，且随作用时间和作用浓度的增加，抑制作用增强。透射电镜观察可见CLA可以引起典型的凋亡细胞形态学变化。而LA未观察到明显的病理变化。流式细胞仪检测CLA作用后将细胞阻滞在G;期，作用5d后G，为722%，并出现凋亡峰。对照组G:期为50.6%。W七stem杂交显示CLA不但引起ERK水平降低，最重要的是使具有活化形式的p一ERK表达水平降低。200脚ol几CLA作用4d后，ERK…l/2水平与对照组相比降低了79.5%，p一ERKI/2水平降低了 86.2%（p<0.05）;200林mol/L CLA作用细胞4d后CyelinDI表达水平降低了87.4%（n二3，p<0.05），而P27的表达与对照组相比升高了1.7倍（n月，尸<0.05）。结论 从本实验得知，CLA对SKBr3细胞增殖有明显的抑制作用，并且存在时间剂量依赖效应。CLA诱导的SKBr3细胞凋亡可能是其作用机理之草四军医大学硕士学位论文一。在对CLA抗肿瘤分子机理探讨的研究中发现，它可以显著降低具有生物活性功能的ERK蛋白磷酸化水平，提示CLA对细胞增殖的抑制作用同ERK信号转导通路密切相关。CLA能够显著降低CyclinDI表达水平;而CLA只能轻微增加P27的表达，这一结果表明，CLA通过调节细胞周期控制蛋白的表达水平阻遏DNA合成，抑制肿瘤的增殖。 因此，CLA的抗肿瘤作用可能通过抑制肿瘤细胞增殖、改变细胞周期成分和诱导凋亡。至于CLA是否影响ERK蛋白激酶的上游激酶和MAPK通路的其它激酶，以及其它的细胞周期控制蛋白，还需进一步的证实。