【摘 要】
：
随着基因治疗的发展和病毒类载体的广泛应用,慢病毒载体在嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）免疫治疗中的作用日益突出。但是由于热稳定性差、需要冷链运输、效价易受温度波动影响等缺点,慢病毒载体液体制剂的储存与运输受到了严峻的挑战。本课题给出了一种慢病毒载体粉末制剂的制备方法,通过采用真空冷冻干燥的方法制备得到了一种新型的慢病毒载体冻干制剂。我们首先构建了具有表达CD19的嵌合抗原受体基因的第三代CAR质粒
论文部分内容阅读
随着基因治疗的发展和病毒类载体的广泛应用,慢病毒载体在嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）免疫治疗中的作用日益突出。但是由于热稳定性差、需要冷链运输、效价易受温度波动影响等缺点,慢病毒载体液体制剂的储存与运输受到了严峻的挑战。本课题给出了一种慢病毒载体粉末制剂的制备方法,通过采用真空冷冻干燥的方法制备得到了一种新型的慢病毒载体冻干制剂。我们首先构建了具有表达CD19的嵌合抗原受体基因的第三代CAR质粒（ss CART-19）,经过基因序列检测并通过中量抽提得到目的质粒,进而采用磷酸钙-DNA共沉淀法进行慢病毒载体的包装制备,澄清过滤后进一步切向流浓缩,得到慢病毒载体浓缩液,采用真空冷冻干燥的方法制备得到冻干制剂。通过对冻干保护剂处方初步筛选与组分优化,并从外观、赋形性、色泽度、溶解性等方面进行评价冻干制剂的理化性质,确定最优处方为海藻糖0.30 g/m L、L-组氨酸0.31 mg/m L、L-丙氨酸0.178 mg/m L、Ca Cl20.020 mg/m L、Mg SO40.015mg/m L,所制备的慢病毒载体冻干制剂外观良好、残余水分含量低、结构保持完整、再分散性较好,慢病毒载体生物滴度可高达9.37E+07 IU/m L,滴度回收率为50.15%。影响因素稳定性实验、高温加速实验和反复冻融稳定性实验等研究显示真空冷冻干燥技术可以用于慢病毒载体固体制剂的制备,并且能够有效改善慢病毒载体不同温度条件下的储存效果、反复冻融稳定性以及对高温等不良环境的耐受能力。
其他文献
为研究饲料中添加甘露寡糖对刺参（Apostichopus japonicus）生长性能、肠道及免疫功能的影响,本试验配制了5组甘露寡糖水平分别为0g/kg（M0）、4g/kg（M1）、8 g/kg（M2）、12g/kg（M3）和16 g/kg（M4）的等氮等脂饲料,试验一投喂初始体重为1.5±0.0g的刺参（幼参）60d,试验二投喂初始体重为92.05±0.67g的刺参（成参）28d,试验一养殖结
知识正逐步取代传统企业资源,成为决定企业成败的关键因素,多主体参与企业创新的重要性得到了一致认同,知识共创成为了企业创新和技术升级的重要驱动力,这一趋势在平台企业的兴起和企业生态化布局发展表现得尤为明显。越来越多的企业通过知识生态系进行知识共创实现了企业创新和快速成长,这引发了学术界和管理实践界对知识生态系统和知识共创的关注。现有的大多数研究基于传统的线性实证分析,从知识主体特质或环境特征角度研究
目的:本研究旨在探究视觉工作记忆（Working memory,简称WM）编码阶段出现轻蔑表情对个体面孔身份识别的影响,并结合事件相关电位技术（Event-related potential,简称ERP）考察编码阶段轻蔑表情对正常个体以及社交焦虑个体面孔身份识别的影响。方法:（1）实验一采用改编后的延迟辨别任务,将快乐面孔作为基线水平（Jackson,Wu,Linden,＆Raymond,2009
作为蛋白饲料原料,鱼粉以全鱼或其加工品剩余部分经蒸煮、压榨、干燥、粉碎而获得的产品。近5年,我国鱼粉年消耗量约250万吨,其中进口约150万吨。目前,鱼粉生产工艺基本相同,在蒸煮、干燥等过程产生大量含有有机物水蒸气,味道难闻、污染环境,烘干鱼溶浆产生废气量约占废气总量80%。因此,分析鱼粉生产废气中有机物成分,研究其处理方法,是鱼粉产业可持续发展迫切需要解决的问题。首先,蒸馏鱼溶浆（采自大连某鱼粉
助读系统是教科书四大系统之一,是阅读课文中提示学习要求、学习重难点以及学习方法,诠释疑难问题的重要内容。部编版小学语文阅读课文的助读系统,主要包括提示类助读系统、注释类助读系统、插图类助读系统、练习类助读系统以及资料补充类助读系统五大类。了解师生对于部编版小学语文阅读课文助读系统的体验和评价,有助于从使用者的角度对助读系统进行评判,拓展部编版小学语文阅读课文助读系统的研究视角,促进助读系统编写的不
菲律宾蛤仔（Ruditapes philippinarum）,广泛分布于我国南北方海区,是我国四大养殖贝类之一。莱州湾保护区由于具有适宜的环境条件,已成为蛤仔天然苗种的重要产区,为我国北方近海蛤仔资源恢复提供了重要保障。本文通过2019～2021年对莱州湾保护区内外水文水质条件,保护区内蛤仔性腺周年发育,蛤仔浮游幼虫、底栖个体资源量及分布,保护区内海水流速流向,底质粒径条件进行采样调查和测定分析。
一直以来,池塘、水库等封闭水体的水体分层问题是造成水体污染、危害养殖动物的关键原因,有效去除水体分层问题是现阶段学者们研究的热点问题。针对这一问题,本团队研制了新型水质调控设施——养水机,养水机良好的水质调控效果已被大连市多家水产养殖基地批量采用,但其去水体分层的具体机理尚未有研究。本文采用水槽实验的研究方法,模拟了养水机的工作过程,探究了养水机在分层水体中去分层作用特性以及不同流量、水体盐度差、
研究背景认知障碍是脑卒中患者发生残疾和死亡的主要原因,其整体发生率约为25%～83%。由脑卒中直接引起或与之密切相关的认知障碍称为卒中后认知功能障碍（post-stroke cognitive impairment,PSCI）。根据认知受损领域的不同,患者可出现注意力、执行力、处理速度、语言、视觉、记忆力等一种或多种认知损伤。根据认知障碍的严重程度,PSCI分为卒中后非痴呆（post-stroke
当前,公共壁画在提升城市形象过程中,发挥了不可替代的作用,并逐渐成为城市文化的重要部分。城市地铁壁画则是城市向外界展示自身形象的主要载体。利用地铁空间创造出“地下文化艺术走廊”,更好地诠释、继承和发展城市文化的精髓,对于城市形象建构具有重要作用。本文以实证研究的方式,对大量的西安地铁壁画作品艺术内涵进行了分析和研究,自2011年西安首条地铁建成以来,地铁壁画呈现出从单一主题到多主题、从写意到写实、
分层水体现象常见于自然界中,学者们普遍认为造成该现象的原因是由于垂向水体间存在密度差异,并且上下水体间的密度界面稳定且不易破坏。水体分层会阻碍上下层水体的物质能量的交换,对水体理化指标及养殖生物产生重大影响。养水机是本团队自主研发的新型水质调控设备,团队前期已分别从水质理化因子、初级生产力、水体中细菌、浮游植物生物量等方面与其他水质调控设备进行比较和分析,结果表明养水机对池塘水质有积极作用,可有效