【摘 要】
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家兔肠炎是养兔生产中造成死亡率最高的一种常见疾病,遗传因素是影响其易感性的众多因素之一。Toll样受体家族(Toll-like receptors, TLRs)是一类1型跨膜蛋白质,在病原体的识
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家兔肠炎是养兔生产中造成死亡率最高的一种常见疾病,遗传因素是影响其易感性的众多因素之一。Toll样受体家族(Toll-like receptors, TLRs)是一类1型跨膜蛋白质,在病原体的识别和先天免疫激活等方面发挥着非常重要的作用。本实验以新西兰兔、加利福尼亚兔、天府黑兔等10个品种(系)共324个个体为试验材料,用测序法扫描TLR4基因的外显子1、外显子2和外显子3的单核苷酸多态位点(SNPs),采用HRM技术研究SNPs在群体中的频率分布情况。在另一个新西兰兔群体中,收集发生肠炎的个体作为Case组(n=125),以84日龄前未发生过肠炎疾病的个体为Control组(n=147),基于Case-Control策略分析分析SNPs与家兔肠炎易感性的关联性。试验结果如下:在TLR4基因的3个外显子中共检测到5个SNP位点,其中外显子1含有1个SNP(c.57 C>T),4个SNPs位于外显子3上(c.566 G>A、c.760 G>A、c.923 A>G、c.1098 G>A),外显子2没有多态性。5个SNP位点中,c.57 C>T和c.1098 G>A为同义突变;c.566 G>A、c.760 G>A、c.923 A>G 3个位点为非同义突变,氨基酸变异分别为Ser189Asn、Glu254Lys、Glu308Gly。基于等位基因在群体中的频率分布结果,发现TLR4基因上这5个SNP为100%连锁,共确定2种单倍型H1(CGGAG野生型)和H2(TAAGA突变型)。其中优势单倍型为H1,在10个品种间的频率范围为0.6563(天府黑兔)~0.8571(布列塔尼亚兔);单倍型H2,在10个品种间的频率范围为0.1429(布列塔尼亚兔)~0.3437(天府黑兔)。TLR4基因在这10个群体中的PIC范围为0.2149(布列塔尼亚兔)~0.3495(天府黑兔),其中福建黄兔、欧洲大白兔、香槟兔、布列塔尼亚的这4个品种PIC值均小于0.25,为低度多态,其余的6个品种为中度多态。在Case-Control关联性分析中,H1单倍型在Case组中出现220次(88.0%),在Control组中出现233次(79.3%);H2单倍型在Case组中出现30次(12.0%),在Control组中出现61次(20.7%)。Case组相对于Control组,其OR值为0.521,95%的置信区间(C.I.)为0.324-0.837(p=0.00645)。结果表明,TLR4基因与家兔肠炎易感性间存在显著相关,其中H2对肠炎的发生具有遗传保护作用。
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