NO-1886增敏生长激素信号通路提高胆固醇7α羟化酶和胰岛素样生长因子-1的表达

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目的:脂蛋白酯酶(lipoprotein lipase,LPL)活化剂NO-1886能够通过下调血浆中脂质、葡萄糖及提高胰岛素敏感性而改善饮食诱导的2型糖尿病。但是具体的药物作用机制目前并不清楚。本实验旨在细胞及整体水平上探讨该化合物对生长激素(growth hormone,GH)信号通路中胰岛素样生长因子-1(insulin like growth factor-1,IGF-1)和胆固醇7α羟化酶(cholesterol 7α hydroxylase,CYP7A1)的作用,并初步探讨其可能的作用机制。 方法:分别以人肝胚G2细胞株(human hepatoma blastoma G2 cells,HepG2 cells)和广西巴马小型猪(Guangxi Bama minipigs)为人肝脏细胞和动物模型,采用免疫印迹法(immuno-blotting)检测CYP7A1、信号调节蛋白α1(signaling regulatory protein α1,SIRPα1)、β-肌动蛋白(β-actin)的表达和信号转导蛋白和转录活化蛋白5b(signal transducer and activator of transcription 5b,STAT5b)中第699位酪氨酸的磷酸化水平。放射免疫分析法(radio immune assay,RIA)检测IGF-1和GH的水平,逆转录-聚合酶链式反应分析(reverse transcription-polymerase chain reaction analysis,RT-PCR)检测猪工作组簇3抗原(swine workshop cluster 3 antigen,SWC3 antigen)的水平。血浆葡萄糖的检测采用葡萄糖氧化酶-4-氨基安替比林法。采用小分子化合物AG490作为JAK2信号通路的阻断剂。 细胞实验: 1.观察NO-1886对CYP7A1表达的影响:包括时间及剂量效应;对GH的依赖性;对JAK2/STAT信号系统的依赖性;观察NO-1886对GH信号通路中负向调控因子SIRPα1的影响; 2.观察NO-1886对IGF-1的影响:检测细胞内及细胞外IGF-1的水平以及该变化对
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