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癌胚抗原（carcinoembryonic antigene，CEA）是一个临床广泛应用的肿瘤标志物，鼠源性抗CEA单抗已广泛应用于结直肠癌、肺癌、乳腺癌等的诊断、复发监测、预后判断及导向治疗和显像研究中。然而，鼠源性抗体的异源性严重限制了其在体内抗体导向治疗和放射显像方面的应用。为此，对抗体分子进行人源化改造或直接制备人源性单抗越来越受到重视。目前，有关研制人源性抗CEA单抗的报道尚很少。 噬菌体抗体库技术是目前应用最为普遍的抗体库技术。它绕过了杂交瘤这一技术难关，模拟抗体多样性的机理，把人淋巴细胞中的Fd和L基因片段，通过RT-PCR技术进行克隆和扩增，并随机组合到表达载体上，构建出大容量的人源性抗体库，同时利用噬菌体展示技术能将特定分子的基因型和表型相统一的特点，即在噬菌体表面表达了特定的蛋白质，则在噬菌体的DNA中必然含有该蛋白质相应的结构基因，从而直接利用抗原通过多次的“吸附—洗脱—扩增”的筛选富集过程，就可以有效地筛选出特异性的人源性抗体的可变区基因，进而制备出人源性单抗。本研究是在成功地从一肺癌患者的肺门淋巴结中获取免疫球蛋白基因并构建出人源性的噬菌体抗体库的基础上，探索以纯化的CEA为抗原从该人源性噬菌体抗体库中筛选出抗CEA单抗的可行性。研究内容包括： 1．用纯化的CEA对人源性噬菌体抗体库进行3轮亲和富集，及用正常人外周血淋巴细胞进行2轮非特异性吸附。在筛选过程中，CEA的浓度逐渐递减，使抗体库中抗体的亲和力不断得到提高。 2．提取筛选后的噬菌体抗体库的总噬菌粒，经过NheⅠ、SpeⅠ双酶切，电泳分离并去除gⅢ片段，T4DNA连接酶连接后电转化到XL1-Blue大肠杆菌中，铺板获取可表达可溶性抗CEA Fab片段的单克隆。 3.随机挑取10株单克隆分别进行表达，将含有可溶性抗体Fab片段的细菌上清进行ELISA鉴定。根据ELISA结果，从中挑选出1株结合活性最强的单克隆，制备其菌体蛋白并进行12%SDS一队GE蛋白电泳及WestemBlot鉴定。 4.提取该克隆的噬菌粒进行基因测序，利用ABIP侧SM 377一%测序仪进行自动测序，并将测序结果与互联网上GenBank十EMBL+DDBJ+PDB基因库中已知基因的核普酸序列进行同源性比较。结果发现所测的轻、重链可变区的基因序列均与人源性免疫球蛋白基因的序列有较高的同源性。 5.将经过筛选所获得的人源性抗CEA噬菌体抗体库对20例胸腔积液患者的胸水CEA进行定性检测，并将检测结果与临床经典检测结果相比较。 经过对人源性噬菌体抗体库的5轮筛选，获得了抗CEA的噬菌体抗体库。提取噬菌粒，双酶切去除9111片段，自连后转化到XLI一Blue大肠杆菌中，获得了表达可溶性抗CEA Fab片段的单克隆，随机挑选出10株单克隆进行ELLISA鉴定，发现其中9株有显著的与CEA结合的活性，提示所获得的抗CEA噬菌体抗体库有较高的敏感性。挑选出其中结合活性最高的克隆6，制备菌体蛋白进行SDS一队GE蛋白电泳，结果发现在25kD处有一新增蛋白带，与抗体Fab段的理论计算值的1/2相符合，Weste二Blot也可见一淡染的条带，证明该克隆表达了抗CEA的抗体Fab片段。提取该克隆的噬菌粒进行基因测序，测序结果与互联网上GenBank+EMBL十DDBJ+PDB基因库中已知基因的核营酸序列进行同源性比较，结果发现所测的轻、重链可变区的基因序列均与人源性免疫球蛋白基因的序列同源（同源性均为91%），提示所表达的抗体片段为人源性抗体Fab片段。将获得的人源性抗CEA噬菌体抗体库对20例胸腔积液患者的胸水CEA进行定性检测，并将检测结果与临床经典检测结果相比较。结果显示，10例临床经典方法检测CEA升高的肺癌患者，其胸水ELISA检测OD45。值明显高于阳性对照;而CEA正常者ELISA检测OD45。值明显低于阳性对照。以本研究获得的人源性抗CEA噬菌体抗体库检测胸水CEA的结果与临床经典 Vll/了检测结果进行相关性分析，结果呈显著相关（厂0.971）。 综上所述，本研究可得出以下结论: 1.本研究从人源性噬菌体抗体库中筛选出了人源性抗CEA抗体Fab片段，为进一步制备和纯化高亲和力的人源性抗CEA单克隆抗体奠定了实验基础，提示从人源性噬菌体抗体库中筛选抗CEA单抗是可行的。 2.利用人源性抗CEA噬菌体抗体库初步定性检测临床20例胸水CEA的结果提示，利用噬菌体抗体库技术所制备的人源性抗 CEA噬菌体抗体库及单克隆抗体具有潜在的临床实用价值。