【摘 要】
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目的：构建卵巢癌人源单链抗体库并运用核糖体展示技术对其进行筛选。
方法：从8名卵巢癌患者志愿者抽取血样，应用淋巴细胞分离液分离外周血淋巴细胞，提取总RNA，通过聚合酶链式
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目的：构建卵巢癌人源单链抗体库并运用核糖体展示技术对其进行筛选。
方法：从8名卵巢癌患者志愿者抽取血样，应用淋巴细胞分离液分离外周血淋巴细胞，提取总RNA，通过聚合酶链式反应(PCR)技术扩增人全套重链可变区基因和轻链可变区基因，并对它们进行拼接；选取人胎盘生长因子(human placentalgrowth factor，PLGF)作为目标抗原对该单链抗体库进行核糖体展示筛选研究；双酶切技术将anti-PLGF单链抗体基因连入表达载体(pET-30(a)+)并转化E.coliBL21进行表达，在LB培养基中37℃培养12小时，经IPTG诱导表达6小时，收获菌体，收集细菌进行裂解，对所获得蛋白进行SDS-PAGE电泳检测。
结果：
1、成功构建卵巢癌人源单链抗体库，库容量为6.5×1013，经测序分析10个阳性重组子的序列，判断该抗体库丰富多样；
2、经过3轮筛选，获得anti-PLGF单链抗体基因，经大肠杆菌克隆表达证实目的抗体分子质量为29kDa，表达量占总体蛋白的2796。
结论：
1、PER技术可以用于构建适用于核糖体展示技术的单链抗体库，且多样性良好。
2、核糖体展示技术是一种对卵巢癌人源抗体简便有效的高通量筛选技术。
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