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目的分别研究苹果皮和苹果果肉中的酚类化合物对小鼠冠状动脉粥样硬化危险因素的影响,及其对血管内皮细胞通透性相关信号通路和基因表达的影响,探讨苹果皮多酚和苹果果肉多酚保护冠状动脉的机制和差异。方法(1)苹果皮和苹果果肉中的酚类化合物采用超声波辅助提取法,采用单因素实验的方法对提取条件进行优化,采用大孔树脂对提取的总酚进行纯化,采用Folin-Ciocalteus法制作没食子酸标准曲线,计算酚类化合物的含量。采用高效液相色谱分析苹果皮多酚(Polyphenolic extracts from apple peels,PAP)和苹果果肉多酚(Polyphenolic extracts from apple fleshes,PAF)中的酚类化合物种类。(2)将32只成年雄性ICR小鼠随机分为4组,每组8只:Control组:给予常规饲料进行饲养;Model组:用含有20%果糖和5%猪油的高果糖、高脂肪(HFHF)饲料进行饲养;PAP组:用HFHF饲料进行饲养,同时每天用250 mg/kg PAP灌胃;PAF组:用HFHF饲料进行饲养,同时每天用250 mg/kg PAF灌胃,持续28天。实验期间各组小鼠经过相应处理后每7天称取体重,每3天测量收缩压,第28天采集各组小鼠血清检测内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)、一氧化氮(Nitric Oxide NO)、丙二醛(Malonaldehyde,MDA),计算动脉粥样硬化指数(Atherosclerosis Index,AI)及胰岛素抵抗指数(Homeostasis model assessment-IR,HOMA-IR)等相关指标。(3)分离培养ICR小鼠原代冠状动脉内皮细胞,将细胞分为4组:Control组:细胞进行常规培养,不进行任何处理;缺氧诱导因子-1α(Hypoxiα inducible fαctor-1α,HIF-1α)组:将HIF-1α表达载体重组质粒转染小鼠冠状动脉内皮细胞;HIF-1α+PAP组:将HIF-1α表达载体重组质粒转染小鼠冠状动脉内皮细胞,随后将PAP(10mg/L)作用于该细胞;HIF-1α+PAF组:将HIF-1α表达载体重组质粒转染小鼠冠状动脉内皮细胞,随后将PAF(10 mg/L)作用于该细胞。检测各组细胞中HIF-1α、ET-1、内皮素受体A(Endothelin receptor A,ETA)、内皮素受体 B(Endothelin receptor B,ETB)、肌球蛋白轻链激酶(Myosin light chαin kinαse,MLCK)、磷酸化肌球蛋白轻链(phosphorylαtion of myosin light chαin,p-MLC)、紧密连接蛋白-1(Zonulαoccluden-1,ZO-1)的mRNA和蛋白的表达水平。结果(1)通过对各超声提取条件进行分析,超声辅助乙醇提取PAP的最佳提取工艺为:提取时间为8.13 min,超声功率为503.22 W,提取温度为62.25℃,料液比为1:28.34,平均提取率42.39±1.24mg/g;超声辅助乙醇提取PAF的最佳提取工艺为:提取时间为10.22 min,超声功率为601.15 W,提取温度为71.73℃,料液比为1:34.11,平均提取率为9.22±1.06mg/g。经高效液相色谱分析,PAP中含有的酚类化合物种类及含量多于PAF。(2)饲养28天,Model组小鼠体重明显高于Control组(P<0.05);与Model组相比,PAP组和PAF组小鼠的体重有所降低,但差异不显著(P>0.05);在整个实验过程中,Control组小鼠收缩压相对稳定,而HFHF饲料饲养的3组小鼠收缩压显著升高,与Model组比较,PAP组和PAF组小鼠收缩压水平有不同程度的降低(P<0.05,P>0.05);与Control组相比,Model组小鼠血清中NO水平显著降低(P<0.01),而ET-1和MDA水平均明显升高(P<0.01);与Model组相比,PAP组和PAF组小鼠血清中NO水平不同程度的升高(P<0.05,P>0.05),而ET-1、MDA水平有不同程度的降低(P<0.05,P>0.05);与Control组相比,Model组小鼠AI水平显著升高(P<0.01),与Model组相比,PAP组和PAF组小鼠AI水平不同程度的降低(P<0.01,P<0.05);与Control组相比,Model组小鼠HOMA-IR水平显著增高(P<0.01),与Model组相比,PAP组和PAF组小鼠HOMA-IR水平均显著降低(P<0.05)。(3)与 Control 组相比,HIF-1α组细胞中 HIF-1α、ET-1、ETA、ETB、MLCK和p-MLC的mRNA和蛋白的表达水平均显著升高(P<0.05),而ZO-1的mRNA和蛋白的表达水平则显著降低(P<0.05);与HIF-1α组相比,HIF-1α+PAP 组和 HIF-1α+PAF 组细胞中 HIF-Iα、ET-1、ETA、ETB、MLCK和p-MLC的mRNA和蛋白的表达水平均显著降低(P<0.05),而ZO-1的mRNA和蛋白的表达水平则显著升高(P<0.05);与HIF-1α+PAF组相比,HIF-1α+PAP 组细胞中 HIF-1α、ET-1、ETA、ETB、MLCK 和 p-MLC的mRNA和蛋白的表达水平均显著降低(P<0.05),而ZO-1的mRNA和蛋白的表达水平则显著升高(P<0.05)。结论(1)苹果皮中含有的酚类化合物的种类多于苹果果肉;(2)PAP和PAF能够降低HFHF饲料饲养的小鼠的收缩压、AI和HOMA-IR,降低血浆中的ET-1和MDA,通过改善导致动脉粥样硬化的高危因素而起到保护冠状动脉的作用,且PAP的上述作用较PAF更强;(3)PAP和PAF能够抑制由HIF-1/ET-1信号通路引起的小鼠冠状动脉内皮细胞通透性增高,从而对冠状动脉产生保护作用。