‘凤丹’牡丹种子内源抑制物质的初步研究

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‘凤丹’(Paeonia ostii‘Feng dan’)产于安徽铜陵凤凰山一带,是药用牡丹中的稀有珍品,为四大名药之首。‘凤丹’主要采用种子繁殖,结籽周期长达6年,种子又具有很长的休眠期,下种至幼苗出土,一般需8个月,多者达20几个月,严重限制了这一传统中药的扩种生产。因此,对生活周期中关键阶段的种子萌发行为的认识,是‘凤丹’生物学特性研究中的重要内容。本文以‘凤丹’种子为材料,通过种子种皮透性、种子不同部位的浸提液生物测定、种子内源抑制物质生物测定、种子中内源抑制物质的分离与鉴别及几种单体物质抑制活性测定的研究,得到了以下结论:1.‘凤丹’牡丹种子的休眠特性。利用当年采摘种子经MS组织培养未发现有萌发现象;解剖观察显示种胚结构完整,但种胚体积小,多包埋于胚乳之中;需要生理后熟才能萌发;种子生活力较强,浸泡54 h后的完整种子和刺破种皮种子均可达到吸水饱和状态;种子浸提液显著抑制白菜种子萌发。表明‘凤丹’牡丹种子休眠与生理后熟和含有萌发抑制物质有关,与种皮障碍无关。2.利用乙醚、乙酸乙酯、甲醇、石油醚和水为浸提剂得到种皮、胚乳和种胚的相应浸提物,对白菜种子发芽率和幼苗生长等均有不同程度的抑制作用。抑制作用由大到小的表现为:根长>苗高和发芽率。种子不同部位浸提液抑制程度为胚乳>种皮>种胚。不同浸提剂浸提物的抑制作用为乙醚浸提物最大,石油醚最小;乙酸乙酯、甲醇和水浸提物的抑制程度因浸提部位和测定项目的不同而不尽相同。3.采用系统溶剂分离法,利用乙醚、乙酸乙酯、甲醇和石油醚为浸提剂得到种皮、胚乳和种胚的相应浸提物,经气谱-质谱联用仪分析(GC-MS),定性定量检测到43种有机化合物,按化学结构可分为12类。其中,不同浸提剂中甲醇浸提液最多为10类32种有机化合物,分别占类别和有机化合物数量的83.33%和74.42%;种子不同部位中胚乳浸提液最多为11类37种有机化合物分别占类别和有机化合物数量的91.67%和86.05%;有机化合物的数量以酯类最多为11种占总数的25.81%、酮类和有机酸类各8种,各占18.60%。单体有机化合物相对含量以有机酸类最高23.19%(种胚甲醇相)~95.19%(种胚甲醇相),其次是酮类和醛类。4.采用模拟研究方法,根据种子浸提液相对含量较高的有机化合物分布特点,选择1,3-二羟基丙酮、羟基丙酮、糠醛、苯酚、乙酸和甲酸6种标准有机化合物,进行抑制活性测定研究结果表明,这些有机化合物在浓度为1~10μl/L时,对白菜种子发芽既有极显著的抑制效果,抑制效果由弱到强的顺序是:羟基丙酮、苯酚、1,3-二羟基丙酮、糠醛、乙酸和甲酸作用均随着抑制物浓度的增大而逐渐增强。对根长生长的影响与发芽的抑制作用表现有所不同,1,3-二羟基丙酮(1~10μl/L)、羟基丙酮和糠醛(1μl/L)处理在较低浓度时有促进作用,高浓度处理表现极显著的抑制作用;其他有机化合物在1μl/L处理极显著地抑制根长生长,但较高浓度处理之间差异多不明显。
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