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目的 使用血管紧张素II（Angiotensin II, ANG II）刺激RAW264.7巨噬细胞，探讨其对巨噬细胞极化及对高迁移率族蛋白B1（High mobility group protein B1， HMGB1）分泌的影响，并进一步研究其机制。 方法 （1）ANG II对HMGB1分泌的影响 用不同浓度ANG II（0，10nmol/L，100nmol/L，1μmol/L，10μmol/L）处理RAW264.7巨噬细胞相应时间（0，3h，6h，9h，12h），提取细胞总RNA与总蛋白，RT-qPCR和western blot分别检测HMGB1 mRNA和蛋白水平。免疫荧光技术检测巨噬细胞 HMGB1 的核浆转移；ELISA 检测细胞培养上清 HMGB1 蛋白水平。 （2）ANG II诱导HMGB1分泌的分子机制 ANG II 处理巨噬细胞后用免疫共沉淀技术检测 HMGB1 乙酰化以及与HMGB1结合的SIRT1 蛋白水平；western blot检测JAK2/STAT3蛋白磷酸化水平。细胞用通路蛋白抑制剂Niclosamide、HBC预处理2h后，再加入ANG II刺激，western blot检测JAK2、STAT3蛋白磷酸化以及HMGB1表达水平的改变。 （3）ANG II诱导巨噬细胞分泌的HMGB1有利于巨噬细胞的极化 Western blot检测ANG II和HMGB1刺激巨噬细胞后iNOS蛋白水平，ELISA检测细胞因子水平。细胞分为不同处理组：对照组，EP+ANG II组，SB+ANG II组，ANG II组，western blot检测巨噬细胞HMGB1以及iNOS蛋白的表达。进一步运用HMGB1 siRNA特异性抑制HMGB1，收集ANG II 刺激后细胞培养上清以及HMGB1 siRNA处理后细胞培养上清，实验分为：对照组，ANG II培养上清与巨噬细胞共培养组， ANG II 培养上清+氯沙坦与巨噬细胞共培养组， HMGB1 siRNA 培养上清与巨噬细胞共培养组，HMGB1 siRNA 培养上清+氯沙坦与巨噬细胞共培养，western blot检测iNOS。 （4）HMGB1对ANG II及AT1R表达的影响 用不同氧化还原状态的 HMGB1 处理巨噬细胞及原代单核-巨噬细胞， western blot检测AT1R蛋白表达，ELISA检测细胞培养上清ANG II的表达。 结果 （1）ANG II能以剂量和时间依赖方式促进HMGB1的分泌，并且10μmol/L ANG II处理巨噬细胞12小时作用最佳；免疫荧光显示ANG II处理9小时HMGB1即发生明显的核浆易位。ELISA结果显示细胞培养上清HMGB1明显增加。 （2）免疫共沉淀结果显示，ANG II能促使HMGB1与SIRT1发生解离，增加HMGB1乙酰化水平。Western blot结果显示ANG II处理后细胞内JAK2/STAT3磷酸化水平均增高；细胞给予Niclosamide、HBC 预处理2h后，JAK2/STAT3磷酸化水平均降低，HMGB1表达水平也降低。 （3） EP+ANG II组，SB+ANG II组巨噬细胞HMGB1表达降低的同时， iNOS蛋白水平也降低，即EP与SB减弱ANG II引起的巨噬细胞极化。HMGB1 siRNA培养上清中几乎无分泌的HMGB1，相比ANG II培养上清与巨噬细胞共培养组，HMGB1 siRNA培养上清或HMGB1 siRNA培养上清+氯沙坦与巨噬细胞共培养组iNOS蛋白水平明显降低。 （4）HMGB1具有促进巨噬细胞ANG II及其受体AT1R表达增加的能力，尤其是二硫键型HMGB1（ds-HMGB1）。 结论 （1）ANG II能通过促进巨噬细胞分泌HMGB1，诱导巨噬细胞重编程为M1型，同时分泌的 HMGB1 可以通过正反馈促进巨噬细胞表达 ANG II 及其受体AT1R。 （2）ANG II能促使HMGB1与去乙酰化酶SIRT1发生解离，增加HMGB1的乙酰化，并通过JAK/STAT信号通路调节HMGB1的分泌。