黑曲霉外源蛋白表达分泌相关基因功能研究

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本论文通过同源重组的方法分别阻断黑曲霉的三个蛋白酶基因dppⅣ、dppⅤ和pepAc,研究其对外源蛋白表达分泌的影响。dppⅣ和dppⅤ是两种二肽蛋白酶基因,其编码的蛋白酶DPPⅣ和DPPⅤ从蛋白N端切除不同的特异二肽。已有报道,米曲霉和烟曲霉中胞外蛋白的降解分别有DPPⅣ和DPPⅤ参与。pepAc是从黑曲霉全基因组序列中识别的与pepA同源的新基因,本论文试图通过阻断研究其编码的蛋白是否也为参与外源蛋白降解的胞外酸性蛋白酶之一。另外,本论文通过同样的方法阻断黑曲霉的一个甘露糖转移酶基因mnn10,分析其对外源蛋白表达分泌的影响,并为进一步研究黑曲霉mnn10基因在糖蛋白高甘露糖链合成中的作用奠定基础。本文还使用类似的方法把pBS△dppⅣ-amd质粒转化dppⅤ基因阻断菌株△dppⅤ#26,获得dppⅤ、dppⅣ基因双阻断菌株△dppⅤ△dppⅣ#2-3。测定这些阻断菌株外源蛋白漆酶的分泌活性,以分析对应基因的阻断对外源蛋白表达分泌的影响。
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