【摘 要】
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烟曲霉感染免疫力低下者引起侵袭性曲霉病(IA),并成为重症患者死亡的主要原因之一,然而其发病机理和毒力因子还不清楚。内醚糖激酶(LGK)是最近发现的可能与细胞壁代谢相关的
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烟曲霉感染免疫力低下者引起侵袭性曲霉病(IA),并成为重症患者死亡的主要原因之一,然而其发病机理和毒力因子还不清楚。内醚糖激酶(LGK)是最近发现的可能与细胞壁代谢相关的真菌激酶。研究烟曲霉内醚糖激酶基因的生理功能具有重要的科学意义。生物信息学分析显示烟曲霉具有3个内醚糖激酶基因(lgk1、lgk2、lgk3),而弱致病的黄曲霉、黑曲霉,土曲霉和构巢曲霉分别具有1到2个内醚糖激酶基因。基因检测发现,烟曲霉内醚糖激酶基因组成型表达,除构巢曲霉菌外,其它曲霉菌的内醚糖激酶基因诱导型表达。在孢子萌发生长阶段,烟曲霉lgk1大量表达,lgk2,lgk3微弱表达。在菌丝生长阶段,lgk1和lgk2大量表达,lgk3微弱表达。采用同源重组技术以及CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除掉烟曲霉lgk1。PCR分别验证基于同源重组技术构建的lgk1缺失菌株ZS1和基于CRISPR/Cas9技术构建的lgk1缺失菌株ZS2。基因检测发现ZS1和ZS2的lgk1没有表达。测序ZS2菌株的lgk1,证实lgk1被完全删除。表型分析显示在含有内醚糖为唯一碳源和能源的基本培养上,ZS2不能生长,ZS1微弱生长。孢子萌发率检测发现ZS1降低14.50%,ZS2降低23.32%。菌丝生长干重检测发现较ZS1降低6.62%,ZS2降低5.44%。本研究结果初步表明烟曲霉lgk1与孢子萌发和菌丝生长相关,是潜在的致病因子。
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