高效除磷酵母菌株的筛选及其磷代谢基本特性研究

来源 :济南大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:lincystar
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近年来,由于工业化、农业现代化和城市化的快速发展,排放的营养物质随之增加,导致水体富营养化现象严重。水体富营养化是全球面临的水环境污染问题,同时也是水体保护最具挑战性的问题之一。而磷的过量排放是造成这一问题的主要原因,因此对磷进行有效去除是亟待解决的问题,对净化水体具有重要的意义。与化学除磷相比,生物除磷具有运行费用低、污泥产量少等节能环保的优势,因而得到了更广泛的应用。在生物除磷系统中,聚磷细菌被认为起到了主要的作用,而酵母菌作为一种单细胞真核微生物,在污水处理系统中常常被忽视,在除磷方面的研究较少。事实上,废水处理系统中酵母菌的种群多样性十分丰富,且酵母菌具有耐渗透压、耐高温和代谢效率高等特点,体内具有良好的酶系,能适应各种特殊的环境。因此,研究酵母菌的磷代谢基本规律,特别是阐明酵母菌磷代谢关键调控因子及其作用规律,明确磷的去除途径,为生物除磷提供一种新途径。本研究将实验室A/O交替生物膜系统中分离纯化出的6株优势酵母菌活化富集后,分别接种于合成废水培养基中进行处理,发现这6株酵母菌均有一定的除磷能力,其中菌株BZ的比增长速率为0.11 h-1,单位时间单位干重酵母菌除磷量为1.246 mgP/(h·g酵母菌),在6株酵母菌中最高,综合考虑生长状况和除磷效率,最终筛选出BZ为高效除磷酵母菌。通过形态学特征、生理生化特性和分子生物学鉴定,可以判定为阿氏丝孢酵母(Trichosporon asahii)。通过烧杯试验考察在不同初始磷浓度下酵母菌BZ的除磷能力。结果表明,随着磷浓度的升高,酵母菌的除磷率随之降低。当磷浓度低于5 mg/L时,酵母菌对磷的去除率达到100%;当磷浓度为10 mg/L时,除磷率仍能达到70%。同时对酵母菌的生长动力学和除磷动力学进行拟合,分别符合Monod方程和米门方程,其动力学方程分别为(?)。本文分析了温度、pH、碳源种类、氮源浓度、碳磷比、溶解氧及微量元素对酵母菌BZ的生长量和除磷效果的影响,确定酵母菌BZ除磷的适宜条件。在温度为1535°C之间,酵母菌都能保持较高的除磷效果,最适宜温度为25°C左右,对磷的去除率达到65%以上;酵母菌BZ对pH的耐受范围较广,pH在58这个范围内,酵母菌的生长和除磷率变化不大,且都有较高的除磷率。其中最适宜pH为6时,除磷率为67%。不同种类的碳源对酵母菌的生长和除磷效果的影响十分显著,酵母菌BZ的最佳碳源为葡萄糖和乙酸钠的混合碳源,除磷率达到68.6%;高氨氮浓度能促进酵母菌BZ的生长,并提高除磷率,在050 mg/L的初始氨氮浓度下,酵母菌BZ的生物量和除磷率随着氨氮浓度的增加而升高;随着C/P的升高,即碳源越充足,酵母菌的生物量越大,除磷率也越高,当C/P小于10时,酵母菌的生长和除磷效果明显受到抑制,当C/P大于75时,除磷率达到90%以上;在0.55 mg/L不同溶解氧条件下,酵母菌均能正常生长且能够保持较高的除磷率,可减少曝气,节约成本;与含微量元素的情况相比,在无微量元素下,最大OD600仅降低0.026,除磷率则从68.6%减少到57.0%。通过对培养体系中磷的质量平衡分析,以及酵母菌对磷的富集量和细胞内外磷含量的分布情况,初步探讨了磷从培养液液相主体向酵母菌细胞内的转移过程。研究发现,在整个培养系统中,当酵母菌BZ达到最大生物量时,除磷量也达到最高值,酵母菌细胞对液相中磷的去除(70%左右)大于EPS对磷的去除(30%)。此时,胞外EPS中正磷占总磷含量的30%左右,菌体细胞内正磷含量占20%左右。EPS主要充当了磷的储存库和中转站的作用,细胞对磷的吸收和转化作用应该是酵母菌BZ除磷系统中最主要的磷去除途径。EPS中主要有糖类和蛋白质,多糖的变化情况可能与酵母菌在富营养情况下分泌EPS,而在饥饿条件下消耗EPS有关;通过对EPS的三维荧光特性分析,在BZ除磷过程中,EPS中荧光类物质以类蛋白物质为主。在进水C/P为40的酵母菌除磷系统中,胞内聚合物中存在糖原质和PHA两种物质。其中酵母菌降解磷酸盐所需的ATP来自PHA的水解,外碳源被酵母菌转化为糖原质作为主要的储能物质。对酵母菌体的扫描电镜和能谱分析结果表明:酵母菌体呈杆状,反应结束后,推测酵母菌体表面可能被钙镁磷酸盐所包裹。本论文筛选出的高效除磷酵母菌Trichosporon asahii对合成废水培养基具有较强的除磷能力,阐明了磷的去除途径和除磷机理,填补了酵母菌除磷领域的空白,丰富和深化了生物除磷理论,为探索废水除磷新技术的开发提供理论参考。
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