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目的:通过科学可靠的响应曲面法考察诃子总酚酸的提取工艺;利用大孔吸附树脂及硅胶柱层析等方法分离诃子中的活性化合物;研究诃子总酚酸及其活性单体化合物的抗菌效果;并探讨总酚酸及其活性单体化合物抗金黄色葡萄球菌所分泌内毒素α-溶血素的作用及其机制。方法:1.以总酚酸的综合评分为指标,对诃子总酚酸的提取工艺进行考察,利用Design-Expert软件预测最优的提取方法。2.利用大孔树脂及硅胶柱层析等方法分离活性单体化合物,并利用波谱方法鉴定了4个化合物的化学结构。3.选择标准菌株革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌)和革兰氏阴性菌(铜绿假单胞菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯杆菌)为研究对象,利用微量二倍稀释法对诃子总酚酸及其分离得到的活性单体化合物,进行体外抗菌实验。利用透射电镜(TEM)和生物膜抑制实验研究诃子总酚酸及其单体化合物的抗菌机制,以及其对金黄色葡萄球菌所分泌的内毒素α-溶血素的抑制作用及其机制。结果:1.利用Design-Expert软件预测的最优提取方法为:29.64倍量的75.82%的乙醇回流提取1.78小时,结合实际情况将提取条件定为回流提取1.8h,溶剂用量30倍,溶剂浓度为75%,综合评分为94.38。2.利用微量二倍稀释法结合大孔树脂及硅胶柱层析法,进而分离得到了4个单体化合物,并利用波谱解析以及理化手段鉴定出了这4个化合物,分别为阿江榄仁素、阿江榄仁素葡萄糖苷、鞣花酸、没食子酸。3.体外抗菌实验及抗金黄色葡萄球菌分泌的α-溶血素实验表明,诃子总酚酸和阿江榄仁素均具有较好的抗菌活性;通过溶血实验发现其抗金黄色葡萄球菌所分泌的内毒素α-溶血素的作用也十分显著,在无抑菌效果的浓度下就可完全抑制α-溶血素的分泌。同时生物膜结晶紫染色、AO/EB荧光染色结果表明,诃子总酚酸和阿江榄仁素不仅对金黄色葡萄球菌生物膜的形成具有明显的抑制作用,还能抑制生物膜内所包裹细菌的生长和繁殖。结论:1.利用响应曲面法对诃子总酚酸的提取工艺进行优化,与传统优化工艺设计相比更精确,还能考察和分析实验中多种因素的交互作用,得到因素和响应值之间的回归方程,使最优提取方案的准确度大大提高。2.诃子总酚酸和阿江榄仁素对金黄色葡萄球菌及其形成的生物膜具有明显的抑制作用,并且能减少生物膜内的活菌和死菌数量,减少了细菌反复感染的可能性。透射电镜结果显示其抗菌效果可能与其对细菌细胞膜的破坏作用有关。溶血实验结合western-blot实验结果表明,诃子总酚酸和阿江榄仁素在无抑菌效果的浓度下就可完全抑制金黄色葡萄球菌内毒素α-溶血素的分泌。