牛病毒性腹泻病毒(Bovine Viral Diarrhea virus，BVDV)属于黄病毒科瘟病毒属的成员。该病毒可引起牛病毒性腹泻-粘膜病(BVD)，主要感染牛，还可感染羊、猪、鹿、骆驼及一些野生反刍动物。牛羊临床症状主要表现为粘膜发炎、糜烂、坏死，腹泻和隐性感染。该病呈世界性分布，尤其是欧美等养牛业发达的国家。目前，本病分布于我国所有的区域，也没有疫苗预防，BVD诊断和监测技术储备严重不足。近年来，在用细胞生产的疫苗和发病猪群中发现了病原的污染，因此，开展BVDV监测技术的研究，界定发病猪群BVDV的来源、危害程度显得尤为重要。　　 本研究中采用RT-PCR及套式PCR方法，对来自浙江、湖南、安徽、江西、广西、辽宁等地的猪病料进行BVDV检测，以其对目前我国猪群中BVDV感染情况及其来源进行评价。结果6省43份猪病料中7份呈BVDV阳性，阳性率为16.3％，说明我国猪群中BVDV的感染情况已经比较严重，应该予以重视。为追踪BVDV在猪体中的流行来源，我们又对细胞培养用国产及进口犊牛血清及8份猪用细胞疫苗进行了检测，结果均能扩增到目的条带。序列分析表明:血清及疫苗中毒株与上述各省野毒株同源性非常高，提示我们猪群感染的BVDV可能来源于猪用疫苗及细胞苗培养用的犊牛血清。　　 本文还根据已发表BVDV标准株Oregon c24v序列设计一对扩增NS3基因主要抗原区域的的特异性引物，用RT-PCR方法从Oregon c24v标准株病毒核酸中扩增得到573bp的目的基因，并将其克隆到PGEM-Teasy载体中，测序鉴定阅读框架正确后再亚克隆到表达载体pET-32a中，经IPTG诱导后在E.coli BL21细菌中成功获得表达。Western Blot结果显示该重组蛋白可以被BVDV阳性血清识别，具有良好的抗原性。　　 目的蛋白经大量诱导表达，可溶性试验证明重组蛋白以可溶性形式存在于超生裂解液上清中，用镍柱亲和层析法从上清中纯化了目的蛋白。以纯化后的目的蛋白作为抗原包被聚乙烯微量反应板，初步建立检测BVDV抗体的间接ELISA方法。实验表明:抗原的最适包被浓度为3.8μg/mL，血清最适稀释度为1:40;最适封闭液为5％脱月旨奶粉，封闭条件为4℃过夜，最佳血清及二抗反应条件及时间均为37℃1h;底物显色液的最佳反应时间为8min;统计学分析后确定阴阳性的临界值为0.4。通过特异性试验、重复性试验、符合性试验及对临床样品检测的结果显示，该方法是一种特异、敏感、快速、操作简便的方法。这为进一步开发BVDV抗体检测试剂盒奠定了基础。