论文部分内容阅读
研究背景及目的:随着全球快速发展的城市化、工业化进程,人类生活方式和生存环境的改变以及基因和遗传等因素的影响,肿瘤的发病率和死亡率在全球范围均呈现逐年上升的趋势。据世界卫生组织统计,2015年全世界新增肿瘤患者约1750万例,其中因肿瘤疾病死亡人数达到870万人,发展中国家占所有新增患者的67%。在我国,2015年新增癌症病例430万,位居世界首位;癌症死亡人数达到并超过280万,占全球癌症死亡总人数的32%。根据组织学分类,肺癌主要分为小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)和非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC),其中非小细胞肺癌约占肺癌总数的85%。尽管非小细胞肺癌的临床诊断和治疗在最近这些年取得了重大的进展,然而非小细胞肺癌患者的5年生存率仍然低于15%。胰岛素样生长因子2受体(insulin-like growth factor2 receptor,IGF2R)属于Ⅰ型膜整联蛋白,稳定状态下,约90%的IGF2R存在于细胞内,其余10%位居细胞膜表面,其对于胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor2,IGF-2)等配体具有高亲和性,对肿瘤的生长可起到抑制作用。基因组印记是一种非孟德尔遗传的表观遗传学形式的基因调控,导致母系和父系等位基因的差异表达。失印(loss of imprinting,LOI)描述了激活通常沉默的等位基因或失活通常活跃的基因拷贝的机制。近年来许多学者通过越来越多的流行病学调查研究,证实IGF2的印记丢失以及信号通路和乳腺癌、胃癌、肝癌、肠癌等多种恶性肿瘤存在密切关系。IGF2基因高表达可以抑制恶性肿瘤的增殖、迁移和侵袭等生物学行为,在肿瘤的生物学特性发挥重要作用,但在非小细胞肺癌中,IGF2对细胞迁移、侵袭及骨转移等调控作用具体机理尚不清楚。我们通过以下实验研究IGF2基因在非小细胞肺癌中的临床意义及相关机制。研究目的:分析IGF2在非小细胞肺癌发生、发展的相关性,探讨IGF2在非小细胞肺癌骨转移及骨溶解的相关机制,为非小细胞肺癌的分子机制的研究及治疗提供理论支持。研究方法:首先,利用GEO数据库获取肺腺癌芯片数据进行了GO通路及差异分析,初步验证了IGF2与非小细胞肺癌的发生及发展的相关性。同时我们选取了在我院进行手术的非小细胞肺癌患者非小细胞肺癌原发灶样本、瘤旁肺组织样本各89例及非小细胞肺癌骨转移灶样本42例,并通过q RT-PCR和免疫组化染色检测IGF2在瘤旁肺组织、非小细胞肺癌原发灶、非小细胞肺癌骨转移灶间的表达差异。然后,我们在非小细胞肺癌细胞系A549和PC9细胞系中,通过转染Sh-RNA及IGF2过表达质粒,下调IGF2的表达或过表达IGF2,并通过CCK8实验、Transwell实验及流式细胞学分析了IGF2对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡及侵袭等恶性生物学行为的影响。最后,我们利用干扰IGF2表达的A549细胞的条件性培养基刺激小鼠骨髓巨噬细胞(bone marrow macrophage,BMM),检测干预IGF2后的条件性培养基对BMMs破骨分化的影响。结果:1.根据数据库芯片分析,我们发现IGF2与非小细胞肺癌的发生及进展成明显相关性;利用组织样本统计分析,我们进一步明确了IGF2在非小细胞肺癌组织中的表达高于正常肺组织,同时IGF2在骨转移灶中的表达又显著高于原发灶。2.干预A549和PC9细胞中IGF2的表达,发现过表达IGF2可促进A549和PC9细胞的增殖和侵袭能力,抑制肿瘤细胞的凋亡;下调IGF2表达可抑制A549和PC9细胞增殖和侵袭能力,抑制肿瘤细胞的凋亡。3.通过干预IGF2表达的条件性培养基刺激BMMs细胞后,我们发现过上调IGF2表达的条件性培养基可以促进BMMs细胞向破骨细胞的分化,而下调IGF2表达的条件性培养基可以抑制BMMs细胞向破骨细胞的分化。结论:通过以上研究结果,我们认为IGF2可能在非小细胞肺癌转移尤其是在骨转移过程中起到重要作用,高表达的IGF2可以诱导非小细胞肺癌细胞的增殖和侵袭能力,并抑制其凋亡能力,同时可促进非小细胞肺癌细胞诱导的破骨细胞分化发挥作用。