浙贝母种质资源生物学性状与理化成分及分子鉴定技术研究

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浙贝母(Fritillaria thunbergii Miq),别名象贝、珠贝,为百合科(Liliaceae)贝母属多年生草本植物。本文以宁波市鄞州区章水镇种植的浙贝母种质资源为材料,采用常规调查法对其生物学性状进行了考察与分析;同时选取宽叶、多籽、三籽、狭叶、新梅园、高三籽等主要种质,采用常规生理生化技术和氨基酸自动分析仪以及HPLC-ELSD和ICP-AES测定其含水量、可溶性总糖、蛋白质、氨基酸、生物碱及矿物质含量。最后对DNA条形码ITS1、ITS2序列在浙贝母种质资源鉴定的应用价值方面进行了初步的探讨。主要研究结果如下:(1)不同浙贝母品种生长状况从好到差依次如下:高三籽、三籽、狭叶、新梅园、宽叶。不同品种浙贝母成熟鳞茎的总生物碱含量从高至低依次为新梅园、狭叶、多籽、三籽和宽叶,含量分别为0.2421%、0.2088%、0.1859%、0.1811%和0.1607%。浙贝母γ辐射后代出现了性状分离,主要表现在主杆增多和增高上。(2)不同品种浙贝母地上部在开花初期蛋白质含量最多,随着时间的推移,蛋白质含量不断减少;而可溶性糖含量方面差异大,如宽叶、多籽、狭叶三个品种的可溶性糖在整个阶段都是在不断增加的;而梅园种则在开花期可溶性糖含量达到最大,到倒苗前期时,糖含量显著减少。不同品种鳞茎在进入休眠期时蛋白质含量最低,休眠期结束达到最高值;可溶性总糖在进入休眠期含量最高,休眠期结束时降到最低值;而生物碱则无明显的改变。研究还发现鳞茎不同部位的理化成分含量存在较大差异,其中蛋白质、可溶性总糖和生物碱主要集中在鳞茎外部,浙贝母鳞茎的蛋白质、可溶性总糖和生物碱含量与其大小无明显的线性关系。(3)DNA条形码技术是一种新型的生物身份识别系统,能够利用鉴别物种内的一段标准的、具有足够变异性、并相对较且短易扩增的DNA片段对生物物种实现快速的自动鉴定。本研究首先采用试剂盒提取法从17个贝母种79个样品中提取了基因组DNA,并进行了纯度与浓度鉴定;然后采用ITS1、ITS2序列引物进行PCR扩增和产物测序,最后进行序列比对,以明确DNA条形码序列ITS1和ITS2在浙贝母种质资源中的鉴定效果。结果发现,浙贝母地方种间的ITS序列差异不大,ITS序列对浙贝母种内分辨率过于低下。由此表明DNA条形码ITS1、ITS2序列并不太适合用作浙贝母的DNA条形码技术。
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