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小鹅瘟(Gosling Plague, GP)是由细小病毒科、细小病毒属中的鹅细小病毒(Goose Parvoviruse, GPV)引起的一种雏鹅急性或亚急性的败血性传染病。本病主要侵害30日龄以内的雏鹅和雏番鸭,具有病程短,传播快,发病率和致死率高的特点,死亡率高达90%-100%。但发病率和致死率随着雏鹅日龄增大而下降。1周龄以内的雏鹅或雏番鸭发病后迅速出现厌食、脏器衰竭,直至死亡,病程约为2-5d。近年来小鹅瘟在我国的一些省、市、自治区均有流行,给养鹅业造成严重的危害,同时也给饲主带来巨大的经济损失,因此受到国内外学者和工作者的广泛关注。1.本试验建立了小鹅瘟病毒套式PCR诊断方法,针对VP3基因保守区设计两对特异性引物,通过优化各种反应条件,最后扩增出与预期大小一致的长度为515bp的基因片段。特异性试验证明,仅有小鹅瘟病毒模板才能扩增出特异性条带。敏感性试验表明,当模板中小鹅瘟病毒核酸含量为0.03264fg/μL时,仍能够检测到,并出现清晰的特异性片段,比小鹅瘟病毒常规PCR诊断方法敏感性高出很多,假阳性率低。2.本试验根据Genbank发表的小鹅瘟病毒B株全基因序列,针对VP3基因保守区设计了一对表达VP3主要结构蛋白的特异性引物,PCR扩增,得到了预期的1605bp的完整基因片段,与PMD19-T载体连接构建重组克隆质粒,然后转化至大肠杆菌感受态细胞DH5α中克隆,经过PCR鉴定和酶切分析鉴定正确后,将阳性重组克隆质粒和表达载体pCold I双酶切,连接构建重组表达质粒,导入DH5a感受态细胞,阳性菌经PCR鉴定和酶切分析鉴定正确后提取阳性质粒转化BL21感受态细胞,用IPTG37℃诱导表达,最后经亲和层析柱纯化获得VP3蛋白,经Western blot分析所表达的蛋白可与小鹅瘟康复血清发生反应。3.以纯化的VP3蛋白作为抗原,通过优化各步反应条件,建立了检测GPV抗体的间接ELISA方法。最终确定抗原最适包被浓度为0.625μg/mL,血清最佳稀释度为1：40,阴阳性临界值判定标准为0D450nm=0.277,这种方法具有良好的特异性、重复性和敏感性,可以用于小鹅瘟病毒的流行病学调查。