第一章CyclinD3对于VDR的转录活性调控的研究 细胞周期是被cyclins和相应的CDK精确调控的。D型cyclins和CDK4／6结合并将其活化，可以使细胞顺利通过G1期。但是近年来的研究发现D型cyclins还可以通过和一些转录因子相互作用来调节后者的转录活性。本文中我们发现cyclinD3能够和维生素D结合蛋白(DBP)在体外相互作用，后者执行将维生素D从血浆运输至各种靶细胞的功能。此外，我们也发现cyclinD3能够和维生素D受体(VDR)相互作用，后者是类固醇激素、甲状腺激素和脂溶性维生素A和D核受体超家族的成员，这种相互作用在用VDR的配体，l，25-(0H)2D3处理后明显增强。在大鼠骨肉瘤细胞Rosl7／2．8中，内源性的cyclinD3和VDR在配体处理的情况下也发现有明显的相互作用。共聚焦分析发现cyclinD3不会影响VDR的细胞内分布而配体活化的VDR能够导致cyclinD3向核内聚集。 CyclinD3正向调节VDR的转录活性，而超表达的CDK4和CDK6会拮抗这种效应。我们还发现DBP和VDR能在酵母中相互作用。它们在体外也有相互作用，而当用配体处理后这种相互作用被大大削弱了。DBP，VDR以及cyclinD3可能形成一个三元复合物。以上的这些结果提示cyclinD3参与了VDR的转录调控，并为我们研究D型cyclins的转录调控功能提供了一些新的线索。 第二章E6-AP通过泛素化降解THl的研究 尽管trihydrophobinl(THl)基因广泛的被表达而且高度的保守，人们对于它的功能仍然不甚了解。我们以前的工作发现THl是A-Raf蛋白激酶的一个新的相互作用蛋白，而且可以特异性的抑制后者的激酶活性；然而THl不会对B—Raf或C—Raf的活性产生影响。为了进一步发现可以和THl相互作用的蛋白，我们采用了酵母双杂交系统进行筛选，发现人类乳头状瘤病毒E6相关蛋白(E6-AP)是THl的一个新的相互作用蛋白。通过体外翻译、体内免疫共沉淀以及显微共聚焦等实验，我们确认了这种相互作用。在人类乳头状瘤病毒(HPV)阳性及阴性的细胞中，我们都发现了内源性THl的泛素化形式。过表达野生型的E6-AP会增强THl的泛素化；而过表达泛素连接酶活性缺失E6-AP突变体则会抑制THl的这种泛素化。而且体外泛素化实验进一步验证了体外翻译的THl可以被E6-AP泛素化。被泛素化后的THl变得不稳定，其半衰期不超过六个小时。这些结果强烈提示我们THl可以作为E6一AP的特异性底物，通过后者催化的多聚泛素化反应而被降解。