研究背景:结肠癌是临床常见的肿瘤,最突出的转移是肝转移,这是导致结肠癌死亡的主要原因。然而目前的临床方案,包括手术、放疗和化疗等,对于结肠癌晚期患者治疗效果十分有限,因此发现更有效和特异的治疗方法来抑制并攻击转移肿瘤是非常重要的。溶瘤病毒疗法作为一种新型的肿瘤疗法,具有安全、高效和副作用小等优点,其能选择性感染肿瘤细胞,在其中增殖,杀伤,但不伤害正常细胞,并能诱导肿瘤相关抗原的释放,形成系统性的抗肿瘤免疫反应,攻击远端以及转移肿瘤,并形成持久的免疫记忆。研究目的:通过构建结肠癌肝转移小鼠模型,一方面观察oHSV2直接的抗肿瘤杀伤作用,另一方面通过观察oHSV2攻击远端或者转移肿瘤,进一步研究其对肿瘤微环境的影响以及引起肿瘤相关的抗肿瘤免疫反应。从而为oHSV2应用于临床治疗结肠癌晚期肝转移提供理论依据。研究方法:本研究中,①我们首先通过脾脏被膜注射法模拟结肠癌肿瘤细胞经血道转移至肝脏的过程,构建结肠癌肝转移小鼠模型,并通过小鼠肝脏高频超声及病理学诊断进行验证;②应用oHSV2对荷瘤小鼠背部皮下原发灶进行治疗并结合高频超声检测,观察治疗组及对照组荷瘤小鼠肿瘤原发灶瘤积大小、肝转移灶的数量和大小以及中位生存期;③采用病理学方法来探究oHSV2对荷瘤小鼠各脏器的影响,评价溶瘤病毒oHSV2的治疗安全性。④选取荷瘤小鼠脾脏作为研究对象,通过病理学及流式细胞检测的方法,检验oHSV2对肿瘤微环境以及机体内免疫细胞的改变;⑤对已成功治愈的结肠癌肝转移小鼠使用同种肿瘤细胞株(CT-26结肠癌)及异种肿瘤细胞株(4T-1乳腺癌)进行二次打击,观察小鼠肿瘤生长情况。研究结果:①通过构建荷CT26结肠癌肝转移Balb/C小鼠模型并治疗以及结合小鼠高频超声检测结果发现,oHSV2可有效抑制荷瘤小鼠背部皮下原发灶肿瘤的生长,并且可以明显减少小鼠腹腔肝转移灶的数量和大小以及延长中位生存期;②通过病理切片观察oHSV2对荷瘤小鼠各脏器的影响,并未发现小鼠脏器造成肉眼和光镜下可见的损伤。③通过病理学及流式细胞检测的方法,我们发现经过oHSV2治疗后,小鼠肿瘤微环境以及机体内的中性粒细胞、NK细胞、T细胞、B细胞以及细胞因子(TNF-a、r-IFN)均被激活,数量明显增多,同时可以降低免疫抑制细胞MDSCs的水平;④通过对已成功治愈的荷CT26结肠癌肝转移小鼠进行同种及异种肿瘤细胞的二次打击发现,经oHSV2治疗后的小鼠对同种肿瘤细胞形成免疫记忆,具有完全免疫能力,而对于异种肿瘤细胞亦具有一定的杀伤效用。研究结论:溶瘤病毒oHSV2对肿瘤有三重杀伤作用,一是直接的细胞毒作用,直接杀伤肿瘤细胞;同时影响肿瘤微环境的免疫原性并且诱导系统性的固有及获得性免疫反应,攻击远端以及转移肿瘤,使机体产生第二重和第三重肿瘤杀伤,并且在这个过程中形成免疫记忆,使机体产生持久的抗肿瘤疗效,防止肿瘤复发,同时具有较好的生物安全性。因此,我们认为oHSV2将具有较好的临床应用前景。