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目的：建立重组人TRAIL腺病毒载体pAdxsi-GFP-hTRAIL(简写为Ad-TRAIL)，并将其分别应用于实体瘤细胞U251和白血病细胞K562，观察顺铂作用下U251对TRAIL的敏感性和Trichostatin A(TSA)/多聚季胺(PB)作用下Ad-TRAIL对K562细胞的感染率。
方法：调取目的基因hTRAIL，并插入脱磷酸，线性化穿梭载体pShuttle-GFP-CMV，经鉴定序列正确后，将TRAIL目的基因构建至亚克隆重组腺病毒载体pAdxsi中；通过倒置荧光显微镜观察重组腺病毒载体携带的绿色荧光蛋白(GFP)在U251细胞的表达确定最适感染复数MOI值；运用溴化四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性；于倒置荧光显微镜下通过观察细胞形态学改变(x200倍)和Hoechst33342染色后的细胞形态学改变(x400倍)来确定细胞凋亡的诱导；碘化丙啶PI染色后通过流式细胞术检测细胞凋亡率，逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测凋亡相关基因的表达水平；Western Blot检测凋亡相关分子的蛋白水平：体外培养人脑胶质瘤U251细胞株，建立人脑胶质瘤裸鼠皮下接种模型。而对于白血病细胞，通过倒置荧光显微镜观察重组腺病毒载体携带的绿色荧光蛋白(GFP)在K562细胞的表达以探讨最适感染复数MOI值，然后分别应用Trichostatin A(TSA)或者多聚季胺(PB)观察重组腺病毒对人慢性粒细胞白血病K562细胞的感染率。
结果：获得人TRAIL片断，构建重组的pShuttle-GFP-CMV-hTRAIL穿梭载体和重组人TRAIL腺病毒载体pAdxsi-GFP-hTRAIL，经Sfi I和XhoI的酶切鉴定，目的基因分子量与预计的相同，测序结果证实插入载体基因序列正确。通过观察绿色荧光蛋白的表达确定感染时的最适MOI值为500。MTT结果显示，顺铂增敏TRAIL组与二者单独应用组相比，有显著抑制细胞增殖的作用(P<0.05)，Hoechst33342染色观察顺铂增敏TRAIL组与二者单独应用组相比有明显的核固缩，核碎裂，说明凋亡显著。流式细胞术检测联合组细胞可见有明显凋亡峰的出现，且与单独组相比有显著性差异(P<0.05)。RT-PCR结果示TRAIL、DR5、Caspase-3基因表达明显上调，Survivin基因表达显著下调，差异均有显著性(P<0.05），但DR4表达无明显变化。Western Blot检测到Caspase-3分子在增敏组的表达明显高于单独组，差异有显著性(P<0.05）。成功建立稳定的裸鼠U251细胞皮下移植瘤模型。对于白血病细胞，重组人TRAIL腺病毒质粒对K562细胞的感染率很低，TSA或PB可以增加其感染率，尤以PB为甚。
结论：成功构建了重组人TRAIL腺病毒载体pAdxsi-GFP-hTRAIL:在顺铂的联合作用下，可以增加人脑胶质瘤细胞U251对TRAIL的敏感性，其分子机制可能与TRAIL、DR5、Caspase-3基因表达上调，Survivin基因表达下调有关，与DR4基因表达无关；成功建立人脑胶质瘤细胞U251的裸鼠动物模型，为下一步进行相关动物实验奠定基础；在TSA或PB作用下可以增加重组腺病毒对K562细胞的感染率。