目的:海产品过敏患病率较高,对人体健康危害也较大,可是目前食物过敏的精确诊断仍然存在困难。原肌球蛋白是甲壳类海产品的主要致敏组分,基于原肌球蛋白的组分诊断可以显著提高虾过敏的诊断准确度。原肌球蛋白对于其他种类海产品过敏的诊断也有重要的意义。但是,由于食物过敏反应具有显著地域和种族特征,饮食文化不同,同样给食物过敏带来复杂性,参阅文献显示,关于原肌球蛋白在虾过敏患者中sIgE、sIgG4的反应频率、识别的抗原表位、跟尘螨/蟑螂等其他物种的交叉反应都存在争议。此外IgG4在虾过敏中的临床意义还不明确。本研究的目的是分析中国北方沿海地区虾过敏患者TM-sIgE和sIgG4抗体表达水平以及所识别的抗原表位谱。方法:1.研究对象本研究所有血清样本均来自天津市港口医院和天津市中医药研究院附属医院。过敏的诊断根据病史和血清sIgE水平确定。2.TM-sIgE和sIgG抗体表达水平制备虾的重组TM蛋白。用生物素标记重组TM蛋白,用抗人IgE/IgG4包被发光微球,构建光激化学发光分析检测体系。优化最优的血清稀释度、包被抗体的浓度等条件。测定过敏患者TM-sIgE和sIgG4抗体表达水平。确定最佳诊断阈值,统计TM-sIgE和sIgG4的反应频率,并统计sIgE与sIgG4的相关性。统计尘螨/蟑螂过敏患者对TM-sIgE的交叉反应率。3.TM-sIgE和IgG4所识别抗原表位谱分析筛选TM-sIgE和sIgG4同时阳性的患者血清样本。用生物素标记合成的多肽,用抗人IgE/IgG4包被发光微球,构建LiCA检测体系。优化最优的血清稀释度、包被抗体的浓度等条件。合成文献报导的TM主要的9个线性表位。分析虾敏感血清的sIgE和sIgG4所识别的抗原表位谱,并进行表位抑制试验。结果:1.一共纳入92名受试者,其中35名虾过敏患者,29名尘螨/蟑螂过敏患者,28名健康志愿者。2.TM-sIgE和sIgG抗体表达水平经优化条件,血清取25μL按1:20稀释,加入50μL 1:200稀释的包被了抗体的发光微球和1:100稀释的生物素化的TM,37℃,孵育30 min。然后加入150μL链霉亲和素标记的感光微球37℃孵育10 min。35名虾过敏患者中,25(71.4%)人TM-sIgE抗体阳性,22(62.9%)人TM-IgG4抗体阳性。TM-sIgE与虾sIgE为显著正相关(r=0.668,P<0.0001)。TM的sIgE与sIgG4存在显著相关性(r=0.485,P=0.003)。尘螨/蟑螂过敏患者均不存在TM的sIgE的交叉反应。3.TM-sIgE和IgG4所识别抗原表位谱分析经优化条件,血清取25μL按1:20稀释,加入50μL 1:200稀释的包被了抗体的发光微球和1:100稀释的生物素化的TM,37℃,孵育30 min。然后加入150μL链霉亲和素标记的感光微球37℃孵育10 min。IgE的两个线性表位,分别对应TM氨基酸位置85-105和265-284,以及IgG4的全部9个线性表位,在筛选的全部患者中均有表达。TM-sIgE水平与TM-sIgE阳性抗原表位数量呈正相关(r=0.650,P=0.026)。IgG4的表位大部分跟IgE的表位重叠。表位抑制试验显示不同的抗原表位之间不存在交叉反应。不同个体之间表位谱异质性较大。结论:在北方沿海地区人群中,TM是虾过敏患者最主要的过敏原,具有诊断价值。sIgE升高者常伴随IgG4升高,但是IgG4不具有诊断价值。虾过敏与尘螨/蟑螂过敏不存在交叉反应。本地区人群TM-sIgE和IgG4所识别抗原表位反应频率跟既往报导不同,可能存在地域差异。IgE识别的抗原表位数量跟sIgE水平呈正相关。