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对虾养殖是我国水产业的重要创汇和支柱产业之一,然而病害却是制约当前对虾养殖业持续发展的瓶颈问题。其中,白斑综合症病毒(WSSV),由于致病性强、危害性大、地域分布和宿主范围广泛,自1993年首次暴发性流行以来,至今已造成了巨大的经济损失,同时也给海洋生态平衡带来了一定的威胁,目前还没有有效的防治方法。应用基因工程技术来干扰病毒与宿主细胞的结合机制,将为预防和控制对虾的病毒性疾病开辟新的途径。因此,本课题利用对虾白斑综合症病毒浙江株(WSSV-ZJ)及其以家蚕杆状病毒表达系统在家蚕蛹中表达的重组囊膜蛋白rVp28作为试验材料,以实验动物克氏原螯虾作为试验对象,采用感染试验、核酸探针杂交试验和免疫试验等方法,研究了WSSV-ZJ株对螯虾的致病性、rVp28对螯虾免疫因子的影响和抗病毒保护效应。主要研究结果如下: 1.WSSV-ZJ株于2001年从宁波地区患病中国对虾中分离得到,经螯虾感染增殖,透射电镜观察显示,与其它地区毒株的形态结构相似,但大小不同:病毒感染组织的粗提液和超薄切片中,完整的病毒粒子呈椭圆形,具有双层囊膜结构,大小分别约为319 nm×69 nm和318 nm×90 nm;精提液中脱掉囊膜的核衣壳呈长杆状,大小约(211～344)nm×(50～63)nm。 2.感染试验表明,水温22～24℃,投喂染毒肌肉组织和注射病毒粗提液,在8天内螯虾的死亡率可达100%。组织切片H. E染色光镜观察显示,WSSV-ZJ株在螯虾体内感染增殖对胃、肠、甲壳下上皮、鳃和肝胰腺等组织的上皮细胞较敏感,呈现细胞核肿大、深染等典型的病变特征。透射电镜观察显示,病毒感染的细胞呈现细胞核肿大、染色质消失;线粒体大量坏死,嵴断裂、脱落;粗面内质网增生、严重扩张等明显的病理变化。DIG标记WSSV特异性核酸探针的原位杂交结果表明,WSSV-ZJ株对螯虾消化道上皮具有很强的组织嗜性,是病毒侵染的主要靶位点。提示病毒的感染增殖造成了机体新陈代谢功能衰退与丧失,最终导致发病死亡。 3.以体重23.0±0.2g的螯虾为试验动物,以重组杆状病毒HyNPV-Vp28感染的家蚕蛹为试验材料,试验分为3个处理组,每组60尾。试验蚕蛹(Test pupa)组:饵料中添加2%的含有表达Vp28基因产物的蚕蛹;对照蚕蛹(Control pupa)