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由柑桔碎叶病毒(citrus tatter leaf virus,CTLV)引起的柑桔碎叶病最早于1962年在隐症的北京柠檬上发现。CTLV可感染许多柑桔品种,引起用枳及其杂种作砧木的柑桔树嫁接口不亲和、植株矮化和叶片黄花。CTLV在我国分布相当普遍,越来越多地使用感病砧木,会严重影响我国的柑桔产业。CTLV传统的检测方法是指示植物鉴定,但其鉴定周期长,季节性强,且需要温网室等设施。因此,有必要建立快速稳定检测CTLV的技术。本研究参考Hailstones等建立的CTLV半巢式RT-PCR检测技术对田间病树不同部位和方位取样进行了检测实验,对四种感病寄主进行了全年检测和CTLV部分序列测定分析,并应用该技术对“948”项目引进的23个柑桔品种材料和重庆市百万吨工程项目788株过渡期候选母树进行了快速鉴定。主要结论如下: 1、对同一种感病的寄主材料不同部位取样检测表明:除老皮外均能检测到CTLV;对两种感病的寄主材料,分别从同一株病树的三个不同方位取样检测表明:除14-2有一个方位外,均能检测到CTLV。说明CTLV在植株内分布不均匀。 2、对四种感病的寄主材料进行全年检测表明:该方法可以全年对田间的柑桔植株进行检测;但在8月份,经半巢式RT-PCR后电泳条带较弱。 3、对“948”项目和重庆市柑桔百万吨工程样品快速鉴定表明:“948”项目引进的23个柑桔品种材料均呈阴性反应,百万吨工程788株候选母树中有21株呈阳性反应,765株呈阴性反应。 4、该方法可对甜橙类、柚、枳橙和多种杂柑等田间柑桔植株进行检测。 5、对我国四个CTLV分离株与一个澳大利亚CTLV分离株、一个日本CTLV分离株和一个巴西ASGV分离株部分序列比对表明:本研究应用半巢式RT-PCR扩增得到的片段是CTLV的CP基因片段;本研究中的CTLV分离株14-2、14-4与澳大利亚一个CTLV分离株亲缘关系较近,本研究中的CTLV分离株14-1、14-3与日本CTLV分离株Li-23亲缘关系较近。