前言 艾滋病，即获得性免疫缺陷综合症(AIDS)，由人类免疫缺陷病毒(HIV)引起，主要感染破坏人体的CD4+T淋巴细胞，损害人体免疫系统，并发各种机会性感染，最终导致死亡，是人类最严重的传染病之一。至2002年底，全球有HIV感染者6000余万，其中有三分之一已死于艾滋病，无一国家可以幸免，我国HIV感染者已达100多万，处于艾滋病快速增长期，流行形势十分严峻。 HIV进入机体后，感染、破坏CD4+T淋巴细胞，而CD4+T淋巴细胞是调节机体免疫反应的关键细胞，病毒不断损伤破坏CD4+T淋巴细胞，导致机体免疫功能紊乱，最终破坏机体免疫系统，引发各种机会性感染，造成死亡。艾滋病治疗的目的就是通过抑制HIV复制来恢复或重建机体免疫功能。在抗HIV感染的免疫过程中，细胞免疫起着决定性的作用。当HIV感染CD4+T淋巴细胞后，CD4+T淋巴细胞产生并释放多种细胞因子，刺激细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、淋巴细胞因子激活的杀伤细胞(LAK)、自然杀伤细胞(NK)等多种杀伤细胞分化、增殖，直接杀死HIV感染细胞，或通过CTL、NK分泌多种细胞因子，如IFN-γ、TNF-α进一步刺激其它细胞的增殖、分化。细胞免疫中，细胞因子具有重要的调节作用。正常人体中，辅助T淋巴细胞(Th)分泌Ⅰ型或Ⅱ型细胞因子，分别调节细胞免疫和体液免疫，相互制约，共同维持机体的免疫平衡。Imami等人发现体内细胞因子存在漂移现象，HIV-1感染早期Ⅰ型细胞因子水平较正常对照高，而进入艾滋病期的患者体内以Ⅱ型细胞因子为主，Ghose R等人也证实Ⅰ型细胞因子有利于保护HIV感染者，而Ⅱ型细胞因子则不利于病情的控制。目前国内少有关于细胞因子的研究报道，为了解我国HIV感染者细胞因子变化情况，我们选取了34例HIV感染者对其体内细胞因子水平进行检测。 目前艾滋病治疗主要是抗病毒药物治疗，最有效的方法是高效抗逆转录病毒治疗(HAART)，在HIV复制周期中最关键的两个阶段是HIV RNA的逆转录和病毒蛋白的翻译、加工，HAART治疗就是通过抑制病毒的逆转录酶(RT)和蛋白酶阻止HIV复制，达到清除体内病毒，恢复和重建机体免疫功能的目的。HAART治疗相对于单一药物治疗，增加了对病毒的作用靶点，产生相加或协同的更强的抗病毒能力，并减少了单一用药的剂量，降低了毒副作用，但长期的临床观察发现，皿人RT仍不能彻底清除潜伏于脑组织和淋巴结中的病毒，并且随着HAART的广泛应用，发现HIV－二出现了交叉耐药和多药耐药，据美国和西欧的研究表明，约5—16％的新感染者已感染了HIV－二耐药株。国外研究已证明在治疗前检出耐药变异预示着抗病毒治疗失败或疗效降低，法国的VIRADApp前瞻性研究发现，根据基因型分析结果改进治疗方案的患者治疗6个月后，病毒载量显著低于对照组汗＜o．0门。＊加dero和＊劝血等人发现，＊V－二耐药变异与病毒亚型有很大关系。我国目前还未开展大规模艾滋病临床治疗，少有关于HIV耐药研究的报道，随着我国艾滋病人数日渐增多，临床治疗已刻不容缓，我国HIV感染者的亚型复杂，不能完全照搬国外耐药变异研究经验，因此，建立我国HIV耐药变异分析方法，进行病毒亚型与耐药变异相关研究，开展耐药监测对于我国艾滋病防治具有重要意义。 材料和方法 1．研究对象：所选病例均按《中华人民共和国HIV／AIDS诊断标准入经中国医科大学艾滋病确认实验室确认。 2．流式细胞仪测定 CD4＋T淋巴细胞绝对计数 3．美国 ROche公司 COBAS AMPLOCOR自动载量仪测定血浆病毒载量 4．34例感染者按1993年美国CDC艾滋病监测病例分类及扩大的诊断标准分为A山两组，E LISLISA方法测定＊V－l感染者血浆中IL－12、IFN－Y、IL－10、IL－6水平 5．纯化HIV刁感染者血浆中HIV刁 6．套式PCR扩增HIV－IRNA pci区基因 夕侧弓物： MAW—26：’W’－－H GAA ATG TGG AAA GGA AGG AC RT—21：CTG TAT ’t’mn TGC TAT TAA GTC ’I’IT TGA TGG G 内侧引物： PRO—l：CAG AGC CAA CAG CCC CAC CA ·2· RT—20：CTG CCA Gh CTA GCT CTG CT C 7．纯化PCR扩增产物 8．A扭377全自动DNA测序仪测定HW－二RN A pl区部分基因序列（蛋白酶1—99密码子和逆转录酶二－200密码子） 测序引物：RT－20：CTG CCA Gh CTA GCT CTG Cw C RT—l：171A AAG CCA GGA ATG GAT GG 9．Bi砸dit软件分析测序结果，网上与国际参比序列比对，辨别蛋白酶和逆转录酶耐药基因变异，并与病毒亚型结合分析，病人HIV刁亚型分类参照中国医科大学艾滋病实验室应用HMA方法进行的HIV－lenv区亚型分析。 结 果 ＊与健康对照相比，mV－且感染者血浆IL一12水平显著降低（P＜o．0二），1＊N－Y、IL－ic水平显著升高（P＜o＊二），IL－6水平明显升高（P＜o．05）。 2·A组血浆IF’N－Y水平明显高于 B组，IFN－Y水平降低与疾病进展密切相关（P＜o．05）。 3．