论文部分内容阅读
目的:本研究通过观察Nogo-A 蛋白在坐骨神经分支选择性损伤（SNI）所致的神经病理性疼痛过程中背根神经节（DRG）和脊髓背角的表达变化，探讨Nogo-A蛋白是否参与痛觉传递，以便为慢性神经病理性疼痛治疗提供新思路。
方法:将成年雄性Sprague-Dawley 大鼠随机分为空白组（navie 组）、假手术组（sham 组）和SNI 组，其中假手术组和SNI 组用von Frey 机械痛敏监测仪监测大鼠损伤侧后爪手术前3d 和手术后1d、7d、14d、21d 的机械缩足阈值（MWT）
作为行为学变化的测定。用免疫荧光标记及Western blot 法观察了上述时间点Nogo-A 蛋白在L5 DRG 和L4-5 脊髓节段的表达。免疫荧光标记观察Nogo-A 蛋白在DRG 和脊髓背角的形态学改变，利用Image-J 图像分析系统对Western blot 染色条带测量后进行半定量分析。
结果:
（1）行为学测定：①假手术组和SNI 组大鼠术前MWT 无明显差异。②假手术组损伤侧术前及术后MWT 差异无统计学意义。③SNI 组大鼠损伤侧术后MWT（g）分别为1d 组13.0±1.3；7d 组8.1±1.7；14d 组4.0±1.1；21d 组8.2±1.1，SNI 组术后7d 组至21d 组MWT 与术前MWT、假手术组MWT 相比均明显降低，以术后14d 降低最明显。
（2）背根神经节（DRG）：①免疫荧光结果如下：空白组、假手术组和SNI组切片经免疫荧光染色后，在背根节感觉神经元中均出现Nogo-A 免疫阳性细胞，其强度由弱至强不等。②通过Western blot 检测，记录Nogo-A 蛋白灰度值，结果如下：空白组与假手术组相比，差异无统计学意义。SNI 组与空白组和假手术组相比，SNI 1d 组的Nogo-A 灰度值变化不明显，差异无统计学意义，7d 组灰度值降低，14d 组Nogo-A 灰度值明显减少，差异有统计学意义，21d 组Nogo-A 灰度值比7d、14d 组增高但与空白组和假手术组相比差异无统计学意义。
（3）脊髓背角：①空白组、假手术组和SNI 1d、7d 组脊髓背角均未见Nogo-A阳性神经元，进一步验证了以往研究。与空白组、假手术组和SNI 1d、7d 组相比，SNI 14d 和21d 组脊髓背角可见染色加深的免疫阳性物并主要集中在脊髓背角Ⅰ、Ⅱ层。②通过Western blot 检测，记录Nogo-A 蛋白灰度值，结果如下：空白组与假手术组相比，两组间差异无统计学意义。与空白组和假手术组相比，SNI组1d、7d 组Nogo-A 蛋白灰度值无明显变化，差异无统计学意义； 14d组Nogo-A 蛋白灰度值增高并达到高峰差异有统计学意义；21d 组Nogo-A蛋白灰度值较14d 组略有降低，但仍高于空白组和假手术组，差异有统计学意义。
结论:Nogo-A 蛋白在背根神经节及脊髓背角的表达可随SNI 模型所模拟的神经病理性疼痛各时相行为学改变而改变，提示Nogo-A 蛋白在外周神经损伤引起的痛觉调制过程中可能发挥重要作用。