基于质谱技术的水产品过敏原检测及鉴定

来源 :上海海洋大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yinhongtao2009
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水产品中含有人体不可或缺的功能营养成分,在居民饮食结构中占据重要部分。食物过敏临床上表现为荨麻疹、哮喘、腹泻、休克等症状。而水产品是威胁患者生命最常见的过敏反应触发因素之一,与大多数其他食物过敏不同的是,水产品引起的过敏反应在多达90%的患者中持续存在,甚至伴随患者终生。因此,开发简单、快速、准确的方法来检测水产品中的过敏原尤为重要。鱼类是水产品家族中的重要一员,鱼骨作为一种下脚料,可以被制成食品,但有研究表明,即使对鱼类副产品进行加工处理,因其中含有热稳定性过敏原,在食用后仍具有致敏性。因此对鱼类副产品的过敏原研究也极为重要。在本文中,使用磁珠(MBs)和基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDITOF MS)技术对水产品基质中的过敏原进行研究,将小鼠单克隆抗人Ig E抗体与MBs偶联后和过敏患者的血清结合捕获水产品基质中特定的未知过敏原,并通过MALDI-TOF MS进行检测。通过MALDI-TOF MS和高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)技术对捕获的经过消化的未知过敏原进行鉴定。使用5%(m/m)的牛血清蛋白(BSA)封闭磁珠和芯片通道,抑制MBs和芯片通道对生物分子的非特异性吸附。该方法首次提出并证明了银鳕鱼体内的小血管抑制素结合蛋白(SVBP)是一种潜在的过敏原,还鉴定出了鱼类中主要的过敏原小清蛋白。采用15份血清和酶联免疫吸附试验(ELISA)分别验证了该方法的普适性和可靠性。同时研究了该方法的重现性、灵敏性、假阳性率(FPR)、甲壳类动物和鱼类可能存在的过敏交叉反应以及脱敏性等问题。研究表明所开发的过敏实验方案具有可重复性,灵敏性为1.13±0.02μg/g,使用8个正常人血清进行过敏实验均未检测到过敏原,基围虾和银鳕鱼之间不存在过敏交叉反应,胰蛋白酶水解蛋白提取物可以降低银鳕鱼的整体过敏性等。将该方法与微流控芯片技术结合,研究了7种鱼类之间的交叉反应性。其中7种鱼都检测到了鱼类中主要的过敏原——小清蛋白,5种鱼小清蛋白之间的序列相似性为64.679%±0.649,证明了该方法可以预测鱼类之间的交叉反应性。使用MALDI-TOF MS技术对大黄鱼鱼骨煮沸不同时间水提物的过敏原性进行了分析和鉴定,确定了来自胱抑素(Cystatin)和苹果酸酶(Malic enzyme)的肽段生物标志物,为水产食品副产品过敏原研究提供指导。通过免疫磁分离(IMS)和质谱(MS)技术分析获得的水产品粗蛋白样品的质谱数据集,我们证明了该方法可用于检测和识别水产品中存在的未知过敏原,以确保过敏患者的安全。
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