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目的:糖尿病肾脏病(Diabetic kidney disease,DKD)是糖尿病患者代谢紊乱引起的肾小球硬化症。DKD患者病情发展为显性肾病后最终转归是进展为终末期肾脏病(ESRD)。DKD发病的早期事件如肾小球肥大、微量白蛋白尿(MA)等与足细胞损伤密切相关,另外其与肾小球硬化、肾功能下降也有一定关系。发现最早的DKD的主要病理变化是肾脏系膜基质增多和肾小球基底膜增厚。足细胞损伤在DKD发生发展中起到关键作用,具有窗状结构的内皮细胞是构成肾小球滤过屏障的第一道防线。既往有研究发现,高糖培养条件可刺激足细胞合成和分泌血管内皮生长因子(VEGF)增多,还能引发足细胞凋亡、脱落,最终使足细胞的数量减少,VEGF的过表达会导致肾小球滤过膜的通透性增加,经滤过膜滤出的血浆白蛋白病理性增多,引发蛋白尿的形成。本研究观察益气养阴消癥通络中药对大鼠VEGF及Flt-1表达的影响,研究其对于糖尿病肾病的治疗效应。方法:1益气养阴消癥通络中药药物血清及正常鼠血清制备健康雄性SD大鼠,SPF级,12只,体重200-220g,购于河北医科大学实验动物中心,动物合格证编号1404079。将大鼠随机分为4组:正常组、低剂量中药组、中剂量中药组、高剂量中药组。正常组给予同等剂量的生理盐水,其余三组根据Meeh-Rubner[1-2]公式以低剂量组为临床半量、中剂量组为临床用量、高剂量组为两倍临床用量折算药物灌胃剂量,所用中药为中药免煎颗粒,购于河北医科大学附属河北省中医院中药房。方药组成如下:地龙、鳖甲、丹参、大黄、僵蚕、乌梢蛇、水蛭、黄芪、玄参、熟地、山萸肉。每只大鼠灌胃剂量2ml,每12h给药一次,连续灌胃3d,最后一次灌胃1~2h后进行心脏无菌取血,4500r/min离心10min将血清分离56℃水浴灭活30min,0.22μm无菌滤过膜过滤2次,-20℃冻存。2小鼠足细胞的培养以及益气养阴消癥通络中药血清对高糖环境下足细胞VEGF、Flt-1表达的影响永生化小鼠足细胞在33℃,γ-IFN许可条件下培养,细胞密度融合至80%左右给予传代,随后在37℃,无γ-IFN的非许可条件下传代培养10-14天使足细胞分化成熟。随后将足细胞分为6组:正常对照组(Normal Control,NC)、高糖组(High Glucose,HG)、正常鼠血清组(Normal Rat,NR)、低剂量中药血清组(Low dose of drug,LD)、中剂量中药血清组(Normal dose of drug,ND)、高剂量中药血清组(High dose of drug,HD),NC组细胞给予培养基含有D-glucose 5.5mmol/L+5%胎牛血清,HG组给予培养基含有D-glucose 30mmol/L+5%胎牛血清,NR组给予培养基含有D-glucose 30mmol/L+5%胎牛血清+5%正常鼠血清,LD组给予培养基含有D-glucose 30mmol/L+5%胎牛血清+5%低剂量中药血清组,ND组给予培养基含有D-glucose 30mmol/L+5%胎牛血清+5%中剂量中药血清组,HD组给予培养基含有D-glucose 30mmol/L+5%胎牛血清+5%高剂量中药血清组。各组刺激24h后,收集足细胞应用免疫细胞化学法、western blot、Real-time PCR检测VEGF、Flt-1 m RNA及蛋白的表达。结果:VEGF、Flt-1在高糖组和正常鼠血清组小鼠足细胞均可见明显的阳性表达,中药血清刺激的小鼠足细胞VEGF、Flt-1在蛋白水平和m RNA水平均较高糖组和正常鼠血清组降低(P<0.05﹚,差异有统计学意义。结论:1高糖环境下培养的小鼠足细胞VEGF、Flt-1表达上调。2益气养阴消癥通络中药能降低高糖培养小鼠足细胞VEGF、Flt-1蛋白及m RNA的表达,证实益气养阴消癥通络中药能通过抑制VEGF、Flt-1的过表达发挥对糖尿病肾病的治疗作用。