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目的:鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci,Cps)是已知的可引起非典型肺炎的胞内寄生病原体。衣原体质粒蛋白作为一种关键毒力因子,在促进病原体侵袭和诱导宿主炎症反应中发挥重要作用,目前对其致病因子研究甚少。本研究旨在探讨Cps质粒蛋白CPSIT_P7诱导THP-1细胞产生炎症因子白细胞介素6(Interleukin-6,IL-6)、白细胞介素8(Interleukin-8,IL-8)以及单核细胞趋化因子1(Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)的能力,探讨其诱导THP-1细胞产生IL-6、IL-8和MCP-1介导的信号转导途径,进而为阐明Cps的致病机制提供新思路和依据。方法:原核表达载体p ET28a-CPSIT_P7为本课题组保存,IPTG(Isoprop-β-D-thiogalactopyranoside)诱导重组蛋白CPSIT_P7的大量表达,纯化并鉴定表达产物后去除其内毒素,细胞因子阵列检测重组蛋白CPSIT_P7刺激THP-1细胞后表达的炎症因子。以不同浓度0.1、1、5和10μg/m L CPSIT_P7刺激THP-1细胞24h后,或者以10μg/m L CPSIT_P7刺激THP-1细胞24h,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-q PCR)检测IL-6、IL-8和MCP-1 m RNA的表达水平,酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测IL-6、IL-8和MCP-1的表达水平。Toll样受体2(Toll-like receptor,TLR2)负显性质粒p ZERO-h TLR2、TLR4干扰RNA psi RNA-h TLR4、TLR6负显性质粒p ZERO-h TLR6、髓样分化因子88(Myeloid differentiation factor 88,My D88)负显性质粒p De Ny-h My D88和Mal(My D88-like adaptor)负显性质粒p De Ny-h Mal转染至THP-1细胞,然后用10μg/m L CPSIT_P7刺激THP-1细胞,RT-q PCR检测IL-6、IL-8和MCP-1 m RNA的转录水平,ELISA检测IL-6、IL-8和MCP-1的表达水平。免疫印迹分析技术(Western blotting)检测IκBα磷酸化水平,此外通过研究NF-κB特异性抑制剂BAY11-7082分别预处理THP-1细胞30min后,10μg/m L CPSIT_P7刺激THP-1细胞6h,Western blotting检测IκBα磷酸化水平,免疫荧光检测NF-κB p65核转位情况,RT-q PCR和ELISA分别检测IL-6、IL-8和MCP-1的m RNA转录水平和表达水平。结果:(1)CPSIT_P7刺激THP-1细胞,用包被了42种细胞因子的细胞因子阵列检测胞内细胞因子水平,结果表明,IL-6、IL-8和MCP-1明显升高。(2)CPSIT_P7能在一定浓度范围和一定时间范围内诱导IL-6、IL-8和MCP-1升高。(3)THP-1细胞转染TLR4、TLR6、Mal和My D88干扰质粒后可显著抑制IL-6、IL-8和MCP-1的表达,而转染TLR2干扰质粒后,IL-6、IL-8和MCP-1无明显改变。(4)CPSIT_P7刺激THP-1细胞后,IκBα的磷酸化水平在30min达到峰值,NF-κB特异性抑制剂BAY11-7082预处理THP-1细胞后,IκBα的磷酸化水平受到明显抑制。(5)CPSIT_P7刺激THP-1细胞6h后,可引起NF-κB p65核转位,NF-κB特异性抑制剂BAY11-7082预处理THP-1细胞后,p65核转位受到抑制。结论:重组蛋白CPSIT_P7能够分别通过TLR4和TLR6激活下游Mal、My D88和NF-κB信号转导通路诱导THP-1细胞表达促炎细胞因子IL-6、IL-8和MCP-1。