【摘 要】
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甜菜碱是植物体内的一种无毒渗透保护剂,它的积累使代谢中的许多重要酶类在渗透胁迫下能保持活性,保证植物正常生长。胆碱单加氧酶(CMO)是指导合成甜菜碱的关键酶。CMO基因的
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甜菜碱是植物体内的一种无毒渗透保护剂,它的积累使代谢中的许多重要酶类在渗透胁迫下能保持活性,保证植物正常生长。胆碱单加氧酶(CMO)是指导合成甜菜碱的关键酶。CMO基因的表达受其上游启动子及转录因子的调控,转录因子与启动子上的顺式作用元件相互作用,促进下游基因的表达。本文通过对CMO启动子盐诱导元件及与其结合的转录因子进行研究,分析CMO基因转录调控的机制。本论文通过凝胶迁移分析实验找到了CMO启动子区段中盐诱导功能元件,以盐诱导功能元件为诱饵,通过酵母单杂交实验分离得到了可能与之结合的转录因子,主要结果如下:1、用Genomatix软件对已知的辽宁碱蓬CMO启动子序列(-267~+128 bp)进行功能元件分析,发现在该序列上存在11个与非生物胁迫相关的顺式作用元件。从中选定了4个与盐诱导表达相关的元件:W-Box、Salt/drought responsive element、GT-1 cis-element和MYB元件用于凝胶迁移分析实验。2、以选定的4个元件为核心序列设计探针,与辽宁碱蓬叶片核蛋白结合,经凝胶阻滞分析,发现有2条探针具有阻滞信号,初步认为Salt/drought responsive elements和MYB元件是CMO启动子中盐诱导相关的功能元件。3、从获得的2个盐诱导功能元件中选取Salt/drought responsive element作为诱饵,将该元件的三串联体构建到酵母菌株中获得诱饵酵母菌株,同时构建辽宁碱蓬叶片cDNA文库,经酵母单杂交实验,筛选出阳性克隆,经测序及序列比对分析,获得了1个与Salt/drought responsive element相互作用的转录因子,该转录因子可能是PAPA-1- like family protein / zinc finger (HIT) family protein。
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