目的：制备鼠抗人羧酸酯酶-2 (human carboxylesterases-2，hCE-2)单克隆抗体(mAb)、对其特性进行鉴定及并做初步应用研究。 方法：以含hCE-2的人肝脏微粒体蛋白混合抗原免疫BALB/c小鼠，采用杂交瘤技术制备鼠抗hCE-2的mAb，并用Protein-G亲和层析法纯化mAb。用间接ELISA法测定mAb的效价，以Western blot鉴定mAb的特异性、免疫组化染色法对mAb相应的抗原进行组织定位。用免疫沉淀和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight massspectrometry，MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质量指纹谱(peptide massfingerprint，PMF)，再通过Mascot在人类蛋白质数据库中分析比对鉴定mAb对应的抗原。用制备的抗hCE-2 mAb，通过Western blot、免疫组化染色法检测hCE-2在人体肝脏及大肠正常组织及其相应癌组织中的表达量。 结果：获得1株可持续、稳定分泌抗hCE-2的mAb的杂交瘤细胞系。杂交瘤细胞分泌的mAb Ig的亚类(型)为IgG1(κ)，腹水mAb的效价达1×10<-7>。Western blot分析显示，在Mr为62 000处有1条清晰的带。免疫组化染色显示，该mAb可与肝细胞的浆蛋白结合(hCE-2存在于肝细胞浆内微粒体)，而不与血管平滑肌细胞内的蛋白结合。该mAb免疫沉淀物的Mr为62 000，与hCE-2的Mr相符。对免疫沉淀的蛋白质进行质谱鉴定证实，该mAb对应的抗原为hCE-2。应用研究表明，hCE-2在人体肝癌及大肠癌组织中的表达量比相应正常组织降低；hCE-2在肝癌患者血清中的表达量比正常人降低。 结论：制备出的鼠抗hCE-2的mAb效价高、特异性良好，为进一步研究hCE-2的功能及其在肝癌、大肠癌等癌症的诊断和治疗中的作用提供了工具。