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聚己内酯（polycaprolactone，PCL）是由ε-己内酯开环聚合而成的合成型聚酯，因其自身的优良性能及可生物降解性，现已应用于多个领域。本实验室从活性污泥中筛得一株可降解PCL的菌株Pseudomonas mendocina DS1001，本论文在其产酶条件、PCL薄膜降解、PCL解聚酶的分离纯化、酶学性质、PCL解聚酶基因克隆及异源表达、蛋白结构与功能等方面进行了研究，对PCL的降解机制进行了探讨，并得到以下结论：（1）研究单因素发酵条件对菌株DS1001产PCL解聚酶的影响，结果显示发酵时间、培养基初始pH、温度、含碳量四个因素影响明显，并通过Box-Behnken组合设计方法设计了一个四因素三水平的响应面优化实验，得出菌株DS1001最佳产酶条件为：培养基初始pH9.0、发酵温度31.27℃、含碳量0.05%（w/v），摇床培养48h，PCL解聚酶活力较优化前提升40%。（2）粗酶液经DEAE离子交换层析纯化得到一个PCL解聚酶纯酶组分，相对分子质量约为28.4KDa，酶的最适反应温度与pH分别为60℃、9.5，在4-50℃、pH5-12范围内酶活力稳定； Ca2+、Mg2+可强烈促进PCL解聚酶活力，而酶活力会受到EDTA、PMSF的抑制；PCL解聚酶对甲醇等有机溶剂具有较强的耐受能力，但吐温-80与Triton X-100强烈抑制酶活力。PCL解聚酶对14C的底物催化效率最高，经质谱检测，PCL解聚酶对PCL的降解产物主要为羟基己酸二聚体，还有部分单体、三聚体及四聚体。PCL解聚酶无界面活性，可降解粗角质，且受角质诱导，推测PCL解聚酶在酶学分类上属于角质酶。（3）对PCL解聚酶基因进行了克隆，并在E.coli BL21宿主菌中成功诱导表达，经Ni柱亲和层析获得了重组蛋白，理论分子量约为29KDa，在N端含有一个由22个氨基酸组成的信号肽序列。通过序列比对并经基因定点突变验证，PCL解聚酶具有一个包含Ser148、Asp198、His228的催化三联体和一个Thr80、Gln149的氧离子空洞，其中任一氨基酸的突变均会造成PCL解聚酶活力的缺失，但并不会影响突变体的表达。（4）菌株DS1001在5天内可将非结晶的PCL薄膜完全降解，整个降解过程可分为“慢-快-慢”三阶段，且是由外到内逐层降解。对PCL降解机制进行了探讨，PCL解聚酶以外切酶作用模式，优先剪切链端的第二个酯键，PCL解聚酶与传统脂肪酶具有共同的催化机制，PCL在结构上与某些天然酶的底物类似，被其中一些底物特异性宽泛降解酶错误识别，从而发生降解。