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突触作为神经元信息传递的基本单位保证了大脑功能的正常运行,而Neuroligin(NL)是位于神经元突触后膜,能够介导突触前和突触后的分化、调节兴奋性突触和抑制性突触的发育与平衡的一类细胞粘附分子。NL不同亚型蛋白对神经元兴奋性及抑制性突触存在不同调节。之前的报道已经提示易感基因调节突触形成并因此影响了E/I平衡,并且NL3R451C基因敲入(NL3R451C KI)自闭症小鼠模型存在着皮层中间神经元的损伤。NLGN基因缺失,敲入或变异基因替代等的小鼠模型,尤其是自闭症相关小鼠模型出现社交能力减弱,学习与记忆能力减退及强迫症相关表型,这与人类自闭症症状相似,且自闭症小鼠的皮层神经元存在兴奋性突触与抑制性突触比例的改变,同时伴有NMDA受体亚单位组成的改变。
目的:本文旨在探索NL不同亚型蛋白在神经元上的分布与功能,并探索这些蛋白对于不同类型神经元的突触发育是否存在不同的调节作用,是否对维持突触比例平衡存在维持作用,并进一步探索NLGN基因突变的自闭症模型小鼠中哪些脑区存在功能性障碍,这些脑区的神经元形态和突触发育的状况是否异常,为进一步阐释锥体神经元和中间神经元上突触发育和比例平衡的调节机制提供证据,并且为更加精细地调控NL在神经元中的表达以研究自闭症的发病原因和治疗自闭症提供方向。
方法:利用慢病毒感染神经元表达NL特异性shRNA以干扰Neuroligin表达来探索敲减NL对于不同类型神经元兴奋性突触与抑制性突触发育的影响;利用c-Fos活性标记抗体来探索NL3R451C基因敲入(knock in,KI)自闭症模型小鼠社交趋新缺陷的关键脑区;利用组织免疫荧光染色技术和图像三维重构处理软件来分析NL3R451C KI自闭症模型小鼠发育异常脑区的神经元形态学、突触蛋白分布、突触形态发育等方面的变化;利用体外培养NL3R451C KI自闭症模型小鼠神经元的技术和图像处理软件来分析神经元形态学、突触蛋白分布及突触形态发育等方面的变化;利用药理学方式尝试拯救这种小鼠的社会行为学缺失。
结果:敲减NL1表达以后,在锥体神经元和中间神经元中都有兴奋性突触密度的显著性下降,在中间神经元中有抑制性突触密度的显著性下降,而在锥体神经元中则没有显著性下降;敲减NL2表达以后,在锥体神经元中存在兴奋性突触密度的显著性下降,在中间神经元里面的减少则没有显著性,抑制性突触密度在锥体神经元和中间神经元里面都有显著性下降;敲减NL3以后,在锥体神经元和中间神经元中都存在兴奋性突触密度的显著性下降,并且在中间神经元上的下降更为剧烈,抑制性突触密度在锥体神经元和中间神经元中都没有显著性的变化。与野生型相比,NL3R451C KI小鼠的前额叶皮层脑区在三厢行为学的社交趋新阶段存在c-Fos激活细胞数的下降,并且该脑区的皮层神经元表现出过度发育,突触后蛋白数量改变,形态发生变化,NMDA受体亚单位数量减少,且相关电生理指标发生变化。该种小鼠的行为学缺陷、突触数量及c-Fos激活状态可通过腹腔注射DCS实现拯救。
结论:Neuroligin蛋白在神经元发育过程中扮演重要角色,并通过对不同神经元类型的突触发育过程进行调节改变兴奋性突触与抑制性突触比例以改变神经元的功能,自闭症的一个重要成因是兴奋性-抑制性平衡的紊乱,发现,Neuroligin蛋白在神经元发育过程中扮演重要角色,并通过对不同神经元类型的突触发育过程进行调节来改变兴奋性突触与抑制性突触的平衡来改变神经元的功能,这对于寻找自闭症的成因与治疗方案至关重要。发现DCS能够恢复KI小鼠在社交趋新阶段的能力缺失,并且DCS能恢复KI小鼠前额叶皮层在社交趋新阶段的c-Fos阳性细胞激活数。PV中间神经元对小鼠三厢行为学中的社交趋新阶段起到了非常关键的调控作用,特异性激活或抑制前额叶皮层中的PV中间神经元能显著地改变小鼠的社交趋新能力,并显著地改变c-Fos细胞激活的数量。
目的:本文旨在探索NL不同亚型蛋白在神经元上的分布与功能,并探索这些蛋白对于不同类型神经元的突触发育是否存在不同的调节作用,是否对维持突触比例平衡存在维持作用,并进一步探索NLGN基因突变的自闭症模型小鼠中哪些脑区存在功能性障碍,这些脑区的神经元形态和突触发育的状况是否异常,为进一步阐释锥体神经元和中间神经元上突触发育和比例平衡的调节机制提供证据,并且为更加精细地调控NL在神经元中的表达以研究自闭症的发病原因和治疗自闭症提供方向。
方法:利用慢病毒感染神经元表达NL特异性shRNA以干扰Neuroligin表达来探索敲减NL对于不同类型神经元兴奋性突触与抑制性突触发育的影响;利用c-Fos活性标记抗体来探索NL3R451C基因敲入(knock in,KI)自闭症模型小鼠社交趋新缺陷的关键脑区;利用组织免疫荧光染色技术和图像三维重构处理软件来分析NL3R451C KI自闭症模型小鼠发育异常脑区的神经元形态学、突触蛋白分布、突触形态发育等方面的变化;利用体外培养NL3R451C KI自闭症模型小鼠神经元的技术和图像处理软件来分析神经元形态学、突触蛋白分布及突触形态发育等方面的变化;利用药理学方式尝试拯救这种小鼠的社会行为学缺失。
结果:敲减NL1表达以后,在锥体神经元和中间神经元中都有兴奋性突触密度的显著性下降,在中间神经元中有抑制性突触密度的显著性下降,而在锥体神经元中则没有显著性下降;敲减NL2表达以后,在锥体神经元中存在兴奋性突触密度的显著性下降,在中间神经元里面的减少则没有显著性,抑制性突触密度在锥体神经元和中间神经元里面都有显著性下降;敲减NL3以后,在锥体神经元和中间神经元中都存在兴奋性突触密度的显著性下降,并且在中间神经元上的下降更为剧烈,抑制性突触密度在锥体神经元和中间神经元中都没有显著性的变化。与野生型相比,NL3R451C KI小鼠的前额叶皮层脑区在三厢行为学的社交趋新阶段存在c-Fos激活细胞数的下降,并且该脑区的皮层神经元表现出过度发育,突触后蛋白数量改变,形态发生变化,NMDA受体亚单位数量减少,且相关电生理指标发生变化。该种小鼠的行为学缺陷、突触数量及c-Fos激活状态可通过腹腔注射DCS实现拯救。
结论:Neuroligin蛋白在神经元发育过程中扮演重要角色,并通过对不同神经元类型的突触发育过程进行调节改变兴奋性突触与抑制性突触比例以改变神经元的功能,自闭症的一个重要成因是兴奋性-抑制性平衡的紊乱,发现,Neuroligin蛋白在神经元发育过程中扮演重要角色,并通过对不同神经元类型的突触发育过程进行调节来改变兴奋性突触与抑制性突触的平衡来改变神经元的功能,这对于寻找自闭症的成因与治疗方案至关重要。发现DCS能够恢复KI小鼠在社交趋新阶段的能力缺失,并且DCS能恢复KI小鼠前额叶皮层在社交趋新阶段的c-Fos阳性细胞激活数。PV中间神经元对小鼠三厢行为学中的社交趋新阶段起到了非常关键的调控作用,特异性激活或抑制前额叶皮层中的PV中间神经元能显著地改变小鼠的社交趋新能力,并显著地改变c-Fos细胞激活的数量。