本项目应用现代分子生物学新技术，在成功建立针对PCV2基因保守序列检测的PCR、荧光定量PCR和LAMP方法，并在对各检测方法进行优化和比较的基础上，结合免疫学和传统病理学检测等手段，对辽宁省猪群PCV2感染进行了较全面系统的调查和研究，主要结果如下：一、参照GenBank中PCV2全基因序列，针对PCV2基因保守序列建立了分子生物学检测技术，包括普通PCR、荧光定量PCR和LAMP方法，并对其条件进行优化和比较。1.普通PCR方法反应体系中引物最佳浓度为0.4μmol/L，最佳退火温度为53℃，灵敏度为2853拷贝/μL PCV2基因组DNA，可在4h内完成对样品的检测。2.荧光定量PCR方法引物和探针最佳浓度分别为0.5μmol/L和0.6μmol/L，可检测的极限拷贝量为15拷贝/μL，较普通PCR方法灵敏度高出190倍；绘制的标准曲线斜率（k）为-3.004973，截距为6.631623，其相关系数（R2）为0.999212，表明该套引物和探针检测效率极高；模板浓度在1.50×103～108拷贝/μL范围内，具有良好的重复性。3. LAMP方法灵敏度达1.4拷贝/μL，较荧光定量PCR方法高出10倍以上。从样品的核酸提取到最终结果报告仅需1.5h，特别适合现地和基层应用，为猪群PCV2感染的临诊检测和流行病学调查提供了一个快速、简便、实用的新技术。二、辽宁省规模养殖场猪群PCV2感染及其分子流行病学调查与分析4.辽宁省规模养猪场PCVD临诊发病情况调查及其分析2010年度辽宁省规模养殖场猪群PCVD临诊场发病率为42.90%(145/338)，随规模场养猪规模的扩大，PCVD临诊场发病率呈上升趋势。其中，基础母猪存栏500头以上规模养殖猪群PCVD临诊场发病率最高（54.76%），显著高于总体平均水平（42.90%）（P<0.05）；基础母猪存栏51～100头规模养殖猪群，PCVD临诊场发病率最低（33.33%），明显低于猪群总体平均水平（42.90%）（P<0.05）。辽宁省内规模化养猪场PCVD临诊发病率具有明显的地域性。其中，辽东地区PCVD临诊场发病率（32.81%）不但明显低于全省总体平均水平（42.90%）（P<0.05），而且显著低于其他地区（P<0.05），与辽中地区（48.28%）差异极其显著（P<0.01）。5.辽宁省规模化养殖场猪群PCV2血清阳性率的调查与其分析应用ELISA检测方法，对2008年-2010年，辽宁省猪群PCV2血清阳性率进行了全面系统的调查研究。结果发现，辽宁省猪场（或猪群）PCV2抗体场阳性率呈现逐年上升趋势，至2010年，全省PCV2抗体场阳性率高达96.77%；其中，2009年辽西和辽中地区PCV2抗体场阳性率均达到100%。被分析的全省不同年度间PCV2抗体场阳性率差异显著（P<0.05），进一步表明，近年来PCV2在辽宁省规模化养猪场的感染范围逐年扩大，并且存在地域性差异。不同规模养猪场猪群血清PCV2监测结果表明，2010年和2011年全省猪群血清PCV2抗体总体阳性率分别为68.98%（776/1125）和76.19%（1280/1680），呈显著上升趋势（P<0.05）；不同地域规模养猪场猪群血清PCV2抗体阳性率分别在65.78%-71.11%和74.33%-78.33%之间，也呈明显上升趋势（P<0.05）。表明辽宁省猪群PCV2感染范围逐年扩大。但不同地域间和不同规模养猪场间猪群血清PCV2抗体阳性率均未见统计学差异（P>0.05）。对不同生长时期猪群调查发现，PCV2抗体总体阳性率为66.28%，其中，断奶仔猪最低（47.22%），经产母猪最高（82.67%）；病原总体阳性率为36.17%，哺乳仔猪最低（18.33%），育肥猪最高（47.89%）。不同生长时期猪群血清PCV2抗体阳性率差异显著（P<0.05），而其PCV2病原阳性率差异极其显著（P<0.01）。表明辽宁省猪群PCV2感染相当严重，其涉及养猪生产的各个环节；猪群随着饲养周期的延长，其PCV2感染率也随之升高。不同年龄、不同品系猪群血清样品检测结果发现，不同品系猪群间PCV2抗体阳性率差异显著（P<0.05）。其中，长白猪群血清PCV2抗体阳性率最高（67.91%），三元杂交猪群血清PCV2抗体阳性率最低（46.43%），杜洛克猪群血清PCV2抗体阳性率低于长白和大白，但又高于二元杂交和三元杂交。表明辽宁省规模化养猪场猪对PCV2的易感性存在明显的品系差异。6.猪群PCV2病原学监测及与猪其他主要病毒性疫病混合感染的研究应用荧光PCR检测方法，对2008年-2010年患病猪群组织样品PCV2病原学监测结果表明，3年平均病原阳性率为54.20%，全省病原学阳性率呈逐年上升趋势，其中，辽南和辽西上升趋势尤为明显（P<0.05）；表明PCV2感染在辽宁省患病猪群中十分普遍。患病猪群病毒性疫病混合感染情况监测结果表明，2008年-2010年，辽宁省猪群以PCV2与PRRSV混合感染为主，其混合感染率高达20.83%；其次是PCV2与CSFV混合感染，混合感染率为6.54%。对2010年-2012年的630份来自屠宰场的猪组织样品进行了病原学监测，结果总体阳性率为53.81%，呈逐年明显上升趋势（P<0.05）；随时间推移，辽东、辽西和辽中地区病原学阳性率均呈明显上升趋势（P<0.05），辽南地区和辽北地区上升趋势极其明显（P<0.01）；但不同地域间未见统计学差异。上述结果表明，辽宁省假定健康猪群中，PCV2隐性感染或/和亚临诊感染普遍存在，且感染率逐年上升，但地域间未见明显差异。假定健康猪群的混合感染监测还发现，PCV2与PRRSV总体混合感染率达13.97%，其中，辽西地区混合感染率高达20.74%，最低的辽东地区也达到7.86%。7.不同基因型PCV2在辽宁猪群中的流行情况及其分析应用PCR方法，对2010年度来自门诊的170份PCV2阳性组织病料进行不同基因型PCV2分析，结果发现，PCV2a单纯感染占12.94%，PCV2b单纯感染率占44.71%，二者混合感染率占42.35%。表明2010年度辽宁省内各地区发病猪群中PCV2b为优势流行基因型，其形式包括CV2b单纯感染和PCV2a与PCV2b混合感染。对2010年-2012年，360份来自屠宰猪PCV2阳性组织样品检测发现，PCV2a单纯感染率占10.28%，PCV2b单纯感染率占49.72%，二者混合感染率占40%。表明辽宁省假定健康猪群中广泛流行的PCV2也以2b基因型为主。由此可见，辽宁省各地猪群中流行的优势基因型为PCV2b。8.41株PCV2毒株全基因序列测定及分子遗传演化分析应用PCR方法和分子克隆技术，扩增并测定了2009年-2012年41株辽宁省PCV2毒株的全基因序列，并对其分子遗传演化进行了系统分析。同源性分析表明，本研究测定的41株PCV2毒株之间同源性为94.3%~100%；不同年度和不同地域毒株间同源性均为94.3%-99.9%。表明近4年来，辽宁省内各地流行的PCV2毒株序列没有明显的地域和时序特征。被分析的41株辽宁PCV2毒株与国内毒株间同源性高达94.5%-100%，与国外毒株间同源性为92.5%-99.6%。表明国内、外PCV2毒株至今变异程度均不大，全球范围内毒株序列均没有明显的地域差异。进化分析发现，41株辽宁PCV2毒株中有38株属于PCV2b基因型，其中，1A/1B和1C亚群（型）各占19株；3株属于PCV2a基因型，但不属于PCV2a基因型2A、2B、2C、2D及2E任一亚群；发现了PCV2a与PCV2b重组型病毒。表明在自然条件下，PCV2不同基因型毒株间在猪体内存在序列重组或漂移现象。9. PCV2感染猪的动力学初步研究应用ELISA和荧光PCR方法，对PCV2感染猪的动力学进行了初步研究，结果发现，PCV2隐性或/和亚临诊感染严重的仔猪群，其PRRSV、CSF和PRV抗体阳性率均低。相关性分析表明，仔猪血清PRRS、CSF免疫抗体阳性率与PCV2核酸阳性率相关性均极显著；仔猪血清PR免疫抗体阳性率与PCV2核酸阳性率相关性显著。表明PCV2感染在一定程度上降低了机体免疫系统的体液免疫功能。假定健康猪群PCV2核酸阳性率与PRRSV核酸阳性率相关性分析发现，不同地域假定健康猪群PRRSV核酸阳性率与PCV2核酸阳性率双侧相关性显著。表明PRRSV感染与PCV2感染间存在相互协同作用。病毒载量测定结果表明，种公猪在PCV2流行中可能发挥着重要作用；除淋巴器官和淋巴组织外，肠道可能为PCV2感染的另一重要靶器官。PCV2具有广泛的组织嗜性，但淋巴组织仍为其主要复制场所。PMWS患猪日龄越小，不论其临诊症状，还是病理剖检变化均越明显，且其变化与组织器官中病毒载量密切相关。PMWS患猪群各组织器官病毒载量与其眼观病理损伤程度呈正相关。