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副溶血性弧菌是引起沿海城市食源性疾病爆发的主要致病菌之一。众多研究表明,人们因食用受到副溶血性弧菌污染的海鲜而导致食源性疾病的爆发。本研究为了解上海市水产品中副溶血性弧菌及致病性副溶血性弧菌的分布状况,通过体外细胞检测方法了解致病性副溶血性弧菌的毒性作用,并利用REP-PCR与ERIC-PCR两种分子分型技术对致病性副溶血性弧菌进行遗传多样性分析。1.上海市水产品中副溶血性弧菌的污染情况及毒力基因的分布为了调查上海市内水产品中副溶血性弧菌的污染情况及毒力菌株的分布,采用GB/T 4789.2013《食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验》方法,并结合聚合酶链式反应及环介导等温扩增技术,从2015年7月-2016年6月采集的206份水产样品中,分离出186株疑似副溶血性弧菌。挑取疑似菌株接种至科玛嘉弧菌显色培养基,并提取菌株基因组DNA对其进行毒力基因鉴定。从上海芦潮港码头收集71份样品中,有59份样品中分离出副溶血性弧菌,污染量为88.36 MPN/100g。上海市水产市场采样副溶血性弧菌污染率高达91.11%,污染量为1361.76MPN/100g。其中,tdh、trh阳性菌株污染率分别为1.6%、1.0%,均分离自虾中。研究结果表明,上海市售水产品中虾类是副溶血性弧菌及致病性副溶血性弧菌污染率最高的水产品种类。水产品市场相对于自然环境而言具有更高的污染率和污染量,水产品捕捞后的一系列操作增加了副溶血性弧菌的污染。该研究结果为上海市食源性疾病的防控提供了科学依据。2.不同来源的副溶血性弧菌菌株对Caco-2细胞的毒性作用为了调查不同来源的副溶血性弧菌的致病性,将分离于水产品和临床分离的40株副溶血性弧菌菌株以Caco-2细胞来靶细胞进行侵染。采用流式细胞仪计数死细胞、活细胞数及定量测定裂解细胞所释放的LDH乳酸脱氢酶两种不同原理的实验方法,测定40株副溶血性弧菌的毒性。在致死能力方面副溶血性弧菌(tdh+/trh+)高于副溶血性弧菌(tdh-/trh-)。在细胞裂解能力上,副溶血性弧菌(tdh-/trh-)毒性为6%,低于副溶血性弧菌(tdh+/trh+)。致病性副溶血性弧菌当中,含双毒力基因的副溶血性弧菌(tdh+trh+)细胞毒性与仅含tdh基因的菌株(tdh+tdh-)毒力相当。研究表明,不同类型水产品中分离的副溶血性弧菌对Caco-2细胞的致死率最高的是斑节虾,裂解能力最强的是白米虾。而在不同采样地点当中,自然环境所分离的副溶血性弧菌毒性最高。40株副溶血性弧菌显示了毒力大小的多样性,水产品中的副溶血性弧菌可能成为危险人类健康的一个潜在风险。3.REP-PCR及ERIC-PCR法对致病性副溶血性弧菌的遗传多样性研究为了了解2009-2016年水产品所分离的副溶血性弧菌及临床菌株的遗传多样性。采用REP-PCR及ERIC-PCR两种技术对不同来源的40株致病性副溶血性弧菌进行了分子分型。结果显示,40株致病性副溶血性弧菌的聚类分析图选取相似系数为0.8时,REP-PCR将其分为6个群,ERIC-PCR将其分为8个群,两个结果都呈现出了丰富的多样性。与REP-PCR相比,ERIC-PCR因其在同一相似系数下具有更多类型而分辨率更清晰。以不同水产品种类来分,河虾比其他水产品种类更具有遗传多样性,且与临床菌株优势谱型一致,具有潜在致病性。以不同采样点来分,上海市恒大水产市场所分离的副溶血性弧菌不仅具有多样性并存在同临床菌株一样的优势谱型,是流行致病菌的聚集地。该研究结果对了解致病性副溶血性弧菌的传播途径和副溶血性弧菌的风险评估提供了科学依据。