论文部分内容阅读
龙眼(Dimocarpuslonganlour.)主要分布于我国广东、广西和福建一带。《泉州本草》和《滇南本草图说》记载龙眼叶有泻火解毒,治感冒,疟疾,疔肿,痔疮等医药功效。Mahatoetal.报道龙眼叶含谷甾醇、豆甾醇、豆甾醇葡萄糖甙,表无羁萜醇、16—卅烷醇、槲皮素、槲皮甙。然而对龙眼叶含有的其他多酚成分的研究却国内外鲜有相关报道。因此论文以此为切入点,重点研究了龙眼叶中具有较强抗氧化和抗癌活性萃取部位的多酚化合物的分离制备,初步探讨了龙眼叶多酚化合物的抗氧化活性与结构的关系,同时探索了龙眼叶多酚化合物对癌细胞生长的影响。这对龙眼叶的活性成分及药理药效等方面,具有重要的学术研究价值,同时为龙眼叶的利用和开发提供科学依据。论文的主要内容和结果如下:
①以氮自由基DPPH为清除对象,进行抗氧化清除试验,利用比色法测定龙眼叶醇提物各部位的清除能力,确定龙眼叶中具有抗氧化活性较强萃取部位。以人肺癌细胞LA为试验材料,利用MTT比色法测定龙眼叶醇提物各部位作用后细胞的存活率,确定龙眼叶中具有抗癌活性较强萃取部位。结果表明,龙眼叶的抗氧化和抗癌活性与多酚化合物含量呈正相关关系。
②对从龙眼叶中提取、纯化总多酚的工艺进行了优化。在单因素试验的基础上,采用Lg(34)正交试验确定了乙醇溶液提取总多酚的最佳工艺参数:乙醇浓度60%,提取时间1.5h,料液比1:20,提取温度80℃,提取3次。
③利用大孔树脂对龙眼叶提取物有效部位进行分段并分离制备该部位的多酚化合物。(1)经过对多种大孔树脂的筛选,确定NKA的吸附和解析综合效果最佳。在单因素试验的基础上确定了吸附工艺参数:pH为6,流速为2.0mL/min,上样液浓度在1.0-2.5mg/mL范围内;洗脱工艺参数:pH为6,水—乙醇(水、30%醇溶液、60%醇溶液、乙醇)梯度洗脱,流速为1.5mL/min。(2)利用大孔树脂NKA将龙眼叶提取物的有效部位分为四段(A、B、C、D)。合并A和B段并进行硅胶层析分离,获得酚类化合物Ⅰ至Ⅵ,合并C和D段并进行SephadexHL—20层析分离,获得酚类化合物Ⅶ。(3)通过核磁共振(NMR),红外吸收(IR),质谱(MS),紫外吸收(UV)等试验并参考相关文献,鉴定各酚类化合物分别为鞣花酸(Ⅰ)、表儿茶素(Ⅱ)、没食子酸乙酯(Ⅲ)、没食子酸(Ⅳ)、山萘酚(Ⅴ)、槲皮素(Ⅵ)、山萘酚—3—O-α—L—鼠李糖甙(Ⅶ)。除槲皮素外,均为龙眼叶中首次分离发现。
④探索从龙眼叶有效活性部位分离出的各多酚化合物对乳腺癌细胞F10和肺癌细胞LA两细胞株增殖的影响。结果表明,化合物Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅵ对肺癌细胞的抑制能力与浓度呈正相关性。化合物Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ,Ⅶ对乳腺癌细胞的抑制能力与浓度呈正相关性。化合物Ⅷ对人乳腺癌细胞的抑制率变化呈现“Λ”形。化合物Ⅰ对肺癌和乳腺癌细胞的抑制效果随浓度的上升呈现下降趋势。
⑤经过实验发现,在多个抗氧化体系中,龙眼叶多酚对羟自由基、超氧阴离子、氮自由基DPPH均有较好的清除效果,同时表现出良好的铁还原能力以及金属螯合能力,其清除效果与其含量呈良好的量效关系,此外还原能力和螯合能力与其含量亦呈现良好的量效关系。另一方面,龙眼叶多酚化合物的结构与其抗氧化能力的强弱有如下几方面关系:(1)酚羟基的数目越多,形成的氢键的数量增加,抗氧化活性明显增强;(2)多个相邻的酚羟基存在,螯合金属亚铁离子能力越强;(3)空间结构不同对抗氧化有不同的影响;(4)糖甙的取代影响化合物自身的抗氧化能力。