MYB是植物转录因子中最大的家族之一,具有多重生物功能。MYB转录因子在植物生长发育、器官形态建成等方面发挥重要作用。本文从拟南芥中分离克隆了一个编码MYB家族基因,将其命名为AtMYBL,对这个基因的表达模式和功能做了初步研究。同时也从甘蓝型油菜(Brassica 中分离克隆了AtMYBL的同源基因BnMYBL,对其表达模式及功能也做了初步研究。主要研究结果如下:1.AtMYBL分离鉴定及序列分析从拟南芥中分离了一个MYB家族成员基因,即AtMYBL,总长为1351 bp,CDS序列为711 bp,编码236个氨基酸,其中包含一个典型的MYB结构域。2.AtMYBL亚细胞定位将AtMYBL基因cDNA全长构建入载体pCAMBIA-2300-eGFP中,获得35S:eGFP-AMraL融合载体并转化拟南芥。利用转基因拟南芥抗性植株进行GFP观察,结果表明AtMYBL定位在细胞核中。3.AtMYBL的转录自激活活性检测MYB家族转录因子根据结构的不同有些成员作为转录激活因子,另一些成员作为转录抑制因子发挥作用。酵母细胞转录自激活分析发现AtMYBL不具有转录自激活活性,因此AtMYBL可能是作为转录抑制子发挥作用。4.AtMYBL表达模式分析通过RT-PCR分析AtMYBL在拟南芥根、茎、叶、花和角果中的表达,结果显示其在花和角果中表达量较高。同时克隆了AtMYBL启动子序列,与GUS报告基因融合构建载体并转化拟南芥。转基因拟南芥GUS活性分析发现,AtMYBL启动子在转基因拟南芥幼苗的子叶活性较强,在根中活性较弱,在成苗花和莲座叶中活性较强。5.AtMYBL转基因拟南芥表型分析构建过量表达载体pMD-AtMYBL,并将其转化拟南芥得到AtMYBL过量表达转基因拟南芥。同时对购买了该基因T-DNA插入突变体。突变体植株经过基因组水平和表达水平鉴定获得mybl纯合突变体。对WT、mybl和35S:AtMYBL过量表达转基因拟南芥生长发育表型分析,结果发现相比较野生型,35S:AtMYBL过量表达转基因拟南芥开花时间提前,而mybl突变体开花时间延迟,并且莲座叶数目增加。6.AtMYBL转基因拟南芥中开花调控基因表达分析为了深入探讨AtMYBL影响拟南芥开花的作用机制,进一步分析了 WT、mybl和35S:AtMYBL过量表达转基因拟南芥中开花调控相关基因表达。RT-PCR结果显示,在mybl中FLC基因表达上调,LFY、SOC1和AP1表达下调,而在35S:AtMYBL转基因拟南芥中FLC表达下调,LFY、SOC1和AP1表达上调。7.AtMYBL与FLC基因启动子互作分析开花调控相关基因启动子分析发现,在FLC基因启动子中有MYB转录因子结合元件,因此推测AtMYBL可能作为上游因子直接作用于FLC基因启动子。酵母单杂交分析显示,在酵母细胞中AtMYBL能与FLC基因启动子直接相互作用。8.BnMYBL过量表达转基因油菜分析从油菜中克隆了 AtMYBL同源基因BnMYBL,构建过量表达载体35S:BnMYBL并转化油菜,T2代转基因油菜表达鉴定获得两个BnMYBL表达量显著提高的株系L17和L18。在过量表达油菜株系L17和L18中,BnFLC基因表达下降,而BnLFY、BnSOC1和BnAP1基因表达上调,相关开花表型正在进一步实验中。9.5BnMYBL表达模式分析从油菜中克隆了BnMYBL基因启动子序列并构建与GUS融合表达载体转化油菜和拟南芥。获得多个BnMYBLP:GUS转基因油菜株系有待进一步鉴定。BnMYBLP:GUS转基因拟南芥GUS活性分析发现,BnMYBL启动子在拟南芥幼苗子叶有较强活性,在根中活性较弱,在成苗花和莲座叶中,有比较强的GUS信号。