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摩根菌（Morganella morganii）属于肠杆菌科摩根菌属,能感染人与动物。有研究指出其为牛的新病原,可引起犊牛腹泻。2016年4月-2017年10月,从呼吸道疾病综合征发病牛鼻拭子内分离得到3株摩根菌,表明摩根菌也可能成为牛呼吸道疾病综合征（Bovine Respiratory Disease Complex,BRDC）的潜在致病菌。肺炎克雷伯菌是导致牛呼吸道感染的常见条件致病菌,而沙门氏菌的感染影响BRDC的发生与发展。此外,经Primer-BLAST预测,已有报道的摩根菌PCR特异性引物可能对鼠伤寒沙门氏菌同样发生扩增。为排除鼠伤寒沙门氏菌对摩根菌的PCR检测可能产生的干扰,提高对BRDC潜在致病菌的检测效率,参考文献合成摩根菌、肺炎克雷伯菌与鼠伤寒沙门氏菌的特异性引物,成功建立了摩根菌、肺炎克雷伯菌与鼠伤寒沙门氏菌的三重PCR检测方法并用于病例样品检测,为养牛业生产中摩根菌、肺炎克雷伯菌感染的诊断以及流行情况的调查提供参考。试验一:牛源摩根菌的分离鉴定2016年4月10日、2017年4月21日、2017年10月11日,对四川广安、宜宾部分肉牛养殖场3批BRDC发病牛采集鼻拭子进行病原分离鉴定,对分离到的优势菌进行16SrRNA基因测序鉴定、构建系统发育树、生化试验、药敏试验及致病性试验。最终获得3株摩根菌,分别暂命名为16GA7、17GA61.2、17YB9。3株菌生化特性表现一致,而药物敏感性差异较大。其中16GA7对哌拉西林、四环素、恩诺沙星敏感,17GA61.2对羧苄西林、哌拉西林、丁胺卡那、恩诺沙星、氟苯尼考敏感,17YB9对羧苄西林、卡那霉素、四环素、米诺环素、恩诺沙星、氟苯尼考敏感。3株菌的致病性具有一定差异,感染小鼠可引起精神沉郁、抱团、腹式呼吸、眼部出现黏性分泌物,濒死小鼠呈张口呼吸。剖检病变主见有肺出血。组织切片显示,3株菌均引起小鼠肺出血,肺泡壁增厚、炎性细胞浸润;脾充血;肝索紊乱,肝细胞肿胀坏死;肾小囊腔隙变窄。此外,17GA61.2导致小鼠肺泡结构消失、出现坏死,脾内多核巨噬细胞增多,白髓结构模糊;17YB9能引起小鼠脾、肝、肾空泡变性。试验二:摩根菌、肺炎克雷伯菌与鼠伤寒沙门氏菌三重PCR检测方法的建立以摩根菌16SrRNA基因可变区、肺炎克雷伯菌孔膜蛋白基因phoE与鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白基因fliC作为靶序列,通过引物量、循环次数和退火温度的优化,建立了摩根菌、肺炎克雷伯菌与鼠伤寒沙门氏菌三重PCR检测方法,并对该方法进行了特异性、灵敏度和可重复性评价。建立30μL反应体系:2×Master Mix 15μL,ddH2O7μL,摩根菌、肺炎克雷伯菌的上、下游引物各1μL,鼠伤寒沙门氏菌的上、下游引物各0.5μL,摩根菌、肺炎克雷伯菌与鼠伤寒沙门氏菌的DNA各1μL。扩增程序为:94℃5 min;94℃45 sec,59℃1 min,72℃1 min,35个循环;72℃10 min。上述方法对鲍曼不动杆菌、奇异变形杆菌、嗜线虫沙雷氏菌、肠炎沙门氏菌、黏质沙雷氏菌、大肠杆菌不产生扩增,检测摩根菌、肺炎克雷伯菌、鼠伤寒沙门氏菌的灵敏度分别为1×108 CFU·mL-1、1.32×107 CFU·mL-1、1.78×107 CFU·mL-1,可重复性良好。试验三:摩根菌、肺炎克雷伯菌与鼠伤寒沙门氏菌三重PCR检测方法的应用对2018年12月-2019年1月四川广安部分养殖场BRDC发病牛采集3批共45份病料进行检测。经摩根菌、肺炎克雷伯菌与鼠伤寒沙门氏菌三重PCR检测,检出摩根菌阳性共13份（28.89%）、肺炎克雷伯菌阳性共8份（17.78%）,其中摩根菌与肺炎克雷伯菌双重感染的样品3份（6.66%）。经传统细菌分离鉴定方法,共有9份分离到摩根菌（20%）、7份分离到肺炎克雷伯菌（15.56%）,其中1份同时分离得到摩根菌与肺炎克雷伯菌（2.22%）。两种检测方法检测摩根菌的吻合率达91.11%,检测肺炎克雷伯菌的吻合率达97.78%。鼠伤寒沙门氏菌未检出。结论:1.从BRDC发病牛鼻拭子中成功分离到3株摩根菌16GA7、17GA61.2和17YB9,可能成为BRDC的新病原。2.成功构建了摩根菌、肺炎克雷伯菌与鼠伤寒沙门氏菌的三重PCR检测方法。反应采用30μL体系:2×Master Mix 15μL,ddH2O 7μL,摩根菌、肺炎克雷伯菌的上、下游引物各1μL,鼠伤寒沙门氏菌的上、下游引物各0.5μL,摩根菌、肺炎克雷伯菌与鼠伤寒沙门氏菌的DNA各1μL。扩增程序为:94℃5 min;94℃45 sec,59℃1 min,72℃1 min,35个循环;72℃10 min。3.摩根菌、肺炎克雷伯菌与鼠伤寒沙门氏菌三重PCR检测结果与传统细菌分离鉴定方法的结果吻合率分别为摩根菌91.11%、肺炎克雷伯菌97.78%,鼠伤寒沙门氏菌未检出。