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纳米银凭借优良的抗菌性能广泛用于化妆品、食品包装和医疗等领域。研究表明,直径小于35nm的纳米粒子可穿过血脑屏障或通过嗅球进入大脑并积累,对中枢神经系统产生毒性作用,因此对于纳米银的神经毒性研究,具有重要意义。本论文选择PC12细胞(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)作为模型,研究纳米银影响PC12细胞毒性和电兴奋性变化的机制。论文首先采用课题组前期方法制备20nm纳米银,然后采用MTT法评价不同浓度20nm纳米银作用PC12细胞不同时间后对细胞增殖率的影响,筛选出产生一级细胞毒性的纳米银浓度和作用时间。接着采用课题组前期建立的电压阈值测定法研究PC12细胞在纳米银作用不同时间后阈值电压的变化,最后利用高内涵技术研究纳米银作用PC12细胞后细胞的ROS含量、胞内Ca2+含量、突起长度和面积、线粒体膜电位的变化,结合PC12细胞的MTT结果和阈值电压测定结果,研究纳米银影响PC12细胞毒性和电兴奋性变化的机制。本论文的具体工作如下:(1)采用硼氢化钠还原硝酸银的方法制备纳米银。透射电镜结果显示制备的纳米银平均粒径为21.45±2.72nm,酶标仪测得的纳米银紫外吸收峰在389nm处,电感耦合等离子体发射光谱仪测得纳米银溶胶的浓度为1319mg/L。(2)采用MTT法评估20nm、不同浓度(5、25、50、100和200μM)纳米银作用不同时间(0.5、0.75、1、4、8、12、24、48和72h)对PC12细胞增殖率的影响。结果显示,5、25、50和100μM的纳米银作用PC12细胞0.5、0.75、1、4、8、12、24、48和72h时,纳米银对PC12细胞产生0级细胞毒性;200μM的纳米银作用PC12细胞0.5、0.75、1、4、8、12和24h表现为0级细胞毒性,作用48h和72h后,对PC12细胞产生1级细胞毒性。(3)采用本课题组建立的电压阈值测定法测定20nm、200μM纳米银作用不同时间后,PC12细胞的阈值电压变化。结果显示,PC12细胞集群的标准阈值为37.8±1.09m V。200μM纳米银作用0.5~1h后,PC12细胞的阈值电压不断上升,在纳米银作用1h后,PC12细胞的阈值电压增至96.4±2.19m V。200μM纳米银作用1~48h后,PC12细胞的阈值电压不断下降,在纳米银作用48h后,PC12细胞的阈值电压下降至23.2±1.92m V。200μM纳米银作用72h后,MEA上的PC12细胞死亡,并萎缩变圆,从电极区脱落。(4)采用高内涵筛选系统利用荧光染色技术研究了20nm、200μM纳米银作用0.5、0.75、1、4、8、12、24、48和72h后,PC12细胞的ROS含量、胞内Ca2+含量、突起长度和面积、线粒体膜电位等指标的变化。高内涵染色数据的结果显示:200μM纳米银作用0.5~1h后,纳米银可使PC12细胞ROS含量下降、突起长度和面积增加、线粒体膜电位增加,PC12细胞的阈值电压升高。纳米银作用4~72h后,纳米银可使PC12细胞的ROS含量升高、突起长度和面积减小、线粒体膜电位降低和Ca2+含量下降,阈值电压降低。