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背景和目的：肿瘤转移是肿瘤患者死亡的首要原因，而骨是肿瘤转移的好发部位之一。约30~40%晚期肺癌患者出现骨转移，肺癌骨转移多为溶骨性损害，导致严重骨痛、病理性骨折、高钙血症及脊髓压迫等一系列并发症，严重影响患者的生活质量和生存时间。因此，积极防治肺癌骨转移具有重要的意义。肿瘤细胞转移到骨髓后分泌多种因子，并与骨微环境中的造血干细胞、破骨细胞（osteoclasts, OCs）、成骨细胞（osteoblasts,OBs）等宿主细胞及骨髓基质发生相互作用，形成“恶性循环”。阻断此过程可望有效干预肿瘤骨转移进程，但目前肺癌骨转移的相关分子机制仍不明确。Jagged1是Notch通路配体之一，其与相邻细胞的Notch特异性受体结合后激活Notch通路，进而发挥生物学作用。Notch通路可被γ-分泌酶抑制剂3,5-二氟笨乙酰-L-丙氨酰-S-苯基甘氨酸t-丁酯{N-[N-(3,5-difluorophenacetyl)-L-alanyl]-S-phenylglycinet-butyl ester，DAPT}阻断。Notch信号通路在胚胎发育中起到重要作用，对成体细胞分化、增殖等生理功能具有重要的调控作用，其异常活化与很多疾病的发生、发展相关。近期的研究表明，Jagged1/Notch信号通路在肿瘤的发生、发展及转移过程中均具有重要作用。高表达Jagged1的前列腺癌和乳腺癌患者预后不佳，同样Notch高表达的非小细胞肺癌患者预后也不佳。Notch通路在生理状态对破骨前体细胞的分化成熟及功能具有重要的调控作用，但Jagged1/Notch通路在肺癌骨转移等病理条件下对破骨前体细胞的影响还未见相关报道。本课题通过免疫组织化学染色检测Jagged1在肺癌骨转移患者转移灶及癌旁组织标本的表达情况，以明确Jagged1与肺癌骨转移的关系。并通过体外实验，研究Jagged1对CD14+单核细胞增殖及其向破骨细胞分化的影响，进而研究Notch通路在肺腺癌A549细胞条件培养液(Conditioned medium, CM）调控CD14+单核细胞增殖及向破骨细胞分化中的作用，阐明肺癌溶骨性骨转移的可能机制，为肺癌骨转移患者“骨相关事件”的治疗提供新的靶点。方法：首先检测肺癌骨转移患者转移灶及癌旁组织标本Jagged1表达，检测Jagged1对CD14+单核细胞向破骨细胞分化、增殖的影响，并检测Notch通路所起的作用。然后，收集A549CM，检测其对CD14+单核细胞向破骨细胞分化、增殖的影响及Notch通路所起的作用。一、Jagged1对CD14+单核细胞破骨分化、增殖的影响免疫组织化学法检测Jagged1在肺癌骨转移患者转移灶和癌旁组织标本中的表达；Ficoll法联合磁珠分选法分离纯化人外周血CD14+单核细胞，CD14+单核细胞分为Control group、Jagged1group、DAPT group，用含（人）巨噬细胞集落刺激因子（macrophage colony-stimulating factor, M-CSF）的α-MEM细胞培养液培养，Jagged1group加入Jagged1重组蛋白，DAPT group加入Jagged1重组蛋白及DAPT。实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time quantitative polymerase chain reaction, qPCR）检测破骨细胞标志基因抗酒石酸性磷酸酶（Tartrate-resistant acid phosphatase, TRAP）、组织蛋白酶K（Cathepsin K, CK）、降钙素受体（Calcitonin receptor, CTR）及Notch靶基因Hes-1(hairy and enhancer of split-1)、Hey-1（HES-related with YRPW motif-1） mRNA的表达；TRAP染色鉴定所分化破骨细胞；扫描电子显微镜(scanning electron microscopy,SEM)检测破骨细胞溶骨功能。CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测各组CD14+单核细胞的增殖。二、Notch通路在A549细胞条件培养液调控CD14+单核细胞破骨分化、增殖过程中的作用CD14+单核细胞分为Control group、A549CM group、DAPT group，用含M-CSF的α-MEM细胞培养液培养，A549CM group加入10%A549CM，DAPT group加入10%A549CM及DAPT。qPCR检测TRAP、CK、CTR及Notch靶基因Hes-1、Hey-1mRNA的表达；TRAP染色鉴定破骨细胞；SEM检测破骨细胞溶骨功能；CCK-8法检测CD14＋单核细胞增殖。细胞免疫荧光法检测Notch活性片段NICD的表达。实验结果：第一部分Jagged1促进CD14+单核细胞破骨分化成熟，并抑制其增殖一、Jagged1在肺癌骨转移灶标本中高表达，在癌旁组织低表达或无表达；二、Jagged1促进CD14+单核细胞TRAP、CK、CTR mRNA的表达；三、Jagged1促进CD14+单核细胞形成TRAP+多核细胞；四、Jagged1增加CD14+单核细胞破骨分化及骨溶解；五、Jagged1抑制CD14+单核细胞的增殖；六、Jagged1增加CD14+单核细胞Notch靶基因Hes-1、Hey-1mRNA的表达。第二部分A549CM通过活化Notch通路促进CD14＋单核细胞向破骨细胞分化，而DAPT可促进其促CD14＋单核细胞增殖作用。一、A549CM活化Notch通路促进CD14+单核细胞TRAP、CK、CTR mRNA的表达；二、A549CM活化Notch通路促进CD14+单核细胞形成TRAP+多核细胞；三、A549CM活化Notch通路促进CD14+单核细胞破骨分化及骨溶解；四、DAPT可增加A549CM促进CD14+单核细胞增殖的能力；五、A549CM增加CD14+单核细胞Notch靶基因Hes-1、Hey-1mRNA的表达；六、A549CM促进CD14+单核细胞NICD向细胞核内转移。结论：Jagged1在肺癌骨转移患者标本中高表达，在癌旁组织低表达或无表达。Jagged1/Notch通路促进CD14+单核细胞向破骨细胞分化且抑制其增殖。肺腺癌A549细胞可通过活化Notch通路促进CD14+单核细胞向破骨细胞分化，Notch通路可作为肺腺癌溶骨性损害的潜在治疗靶点。