背景：变应性鼻炎是特应性个体接触变应原之后由免疫球蛋白E介导的,多种免疫细胞与细胞因子参与的鼻粘膜慢性反应性疾病,属中医学“鼻鼽”范畴。中医药在治疗变应性鼻炎方面有独特优势。本课题组长期进行变应性鼻炎的治疗研究,自拟方“别敏”在临床试验和动物实验中均表现出良好的免疫调节功能,为了进一步研究方剂的药物组成以及剂量配比关系,前期从复方中筛选出三种有效单体成分黄芩苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷,通过运用均匀设计法构建数学模型,对三种中药单体进行优化配比实验,并结合细胞层面的研究加以验证,对重新组成的单体小复方进行相关研究发现,当三者配伍比例为1：2.14：2.65时,为最优配比,可以有效抑制刀豆素A诱导的变应性鼻炎小鼠脾淋巴细胞增殖,纠正Thl/Th2失衡,但是其具体机制不明。本研究基于前期的结果进一步深入,通过在不同时间点连续观察优化配比的小复方对刀豆素A引起的变应性鼻炎小鼠脾淋巴细胞增殖的抑制作用,细胞周期变化以及细胞内游离钙离子浓度变化的影响来进一步探讨单体小复方的免疫调节机制。目的：探索复方“别敏”中经过优化配比的三种中药单体——黄芪甲苷、淫羊藿苷、黄芩苷按照优化配比组合成的单体小复方对变应性鼻炎模型小鼠脾淋巴细胞的免疫调节机制。方法：首先采用经典的变应性鼻炎造模方法——卵清蛋白与氢氧化铝凝胶混合液腹腔注射Balb/c小鼠,每周一次,一共注射三次。第四周开始每天在固定时间给予卵清蛋白溶液滴鼻激发变应性鼻炎反应,滴鼻持续一周,最后建立变应性鼻炎小鼠模型。其次无菌获取小鼠脾脏,分离并体外培养脾淋巴细胞,进行细胞实验研究。将细胞分为空白对照组、刀豆素A组、复方组,运用细胞增殖——毒性检测试剂盒分别在12h、18h、24h、48h、72h共五个时间点连续观察细胞的增殖反应,通过酶标仪检测细胞的吸光度值以及计算复方对淋巴细胞的增殖抑制率来确定复方发挥作用的时间—效应关系和最佳作用时间。运用流式细胞仪分别在12h、18h、24h、48h共四个时间点连续检测各组细胞细胞周期分布的改变,探索各组细胞周期分布随着时间变化的特点,并最终确定小复方对细胞周期分布发挥最显著作用的时间点。通过利用荧光探针Fluo-3/AM与细胞内游离Ca2+特异结合发出荧光原理,借助荧光定量分析仪分别在12h、18h、24h、48h共四个时间点连续检测各组细胞的荧光强度来间接反映细胞内游离Ca2+浓度,探索各组细胞内Ca2+浓度随时间变化的特点,以及复方发挥作用的最佳时间,并用荧光显微镜拍摄荧光照片。结果：经优化配比的三种中药单体组成的小复方可以有效抑制刀豆素A诱导的变应性鼻炎模型小鼠脾淋巴细胞增殖,这种抑制作用在第12h与刀豆素A组相比就有显著差异(P<0.01),并且复方对细胞增殖的抑制率随着时间推移逐渐增加,在第48h达到最大值,呈现出一定的时间—效应关系,在第72h,三组的吸光度值皆下降,镜下观察细胞形态较之前的时间点差,增殖活力不足。经流式细胞仪检测各组细胞细胞周期分布变化发现,刀豆素A可以通过降低G0/G1期百分比,升高S期与G2/M期百分比而促进细胞进入分裂期,结果与空白对照组相比有显著差异(P<0.01或P<0.05),这种作用随时间推移增强。加入复方干预之后,可以发现复方可以在上述四个时间点均升高G0/G1期百分比(P<0.01),并降低S期与G2/M期百分比(P<0.01或P<0.05),这种作用在第24h最显著。经荧光定量分析仪检测发现,在各个时间点,刀豆素A组与空白对照组相比均有显著差异(P<0.01),复方组与刀豆素A组相比亦有显著差异(P<0.01)。前24h,刀豆素A诱导后的淋巴细胞荧光强度随时间推移逐渐增强,而复方组可以明显抑制刀豆素A导致的荧光强度升高,降低细胞内Ca2+浓度,其抑制作用在第24h较显著。结论：中药单体小复方可以抑制刀豆素A诱导的变应性鼻炎模型小鼠脾淋巴细胞增殖,其作用机制可能通过降低细胞内游离钙离子的浓度,从而抑制细胞由G0/G1期进入S与G2/M期,阻滞细胞周期的而发挥作用。结论：由黄芩苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷经优化配比组成的中药单体小复方可以抑制刀豆素A诱导的变应性鼻炎模型小鼠脾淋巴细胞增殖,其发挥作用的机制可能通过降低细胞内游离钙离子浓度,从而抑制细胞由G0/G1期进入S和G2/M期而发挥作用。