蒜头果蛋白的分离、纯化、结构鉴定及生物活性研究

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蒜头果(Malania oleifera Chun et Lee)属于铁青树科(Olacaceae)蒜头果属,将其种子经过去壳、捣碎、抽提、硫酸铵沉淀、疏水层析等步骤,得到一种蛋白质(称为蒜头果蛋白).样品中不加2-巯基乙醇处理,经SDS-PAGE电泳显示单一条带,其分子量为55kD左右;加2-巯基乙醇后,有两个条带,分子量大的是A链,其分子量为30kD左右;分子量小的是B链,其分子量为23kD左右.中科院上海生化所蛋白质组学分析测试中心测得A链的N-末端序列为NH<,2>-D-E-T-X-T-D-E-E-F-N(X一般情况下为C),B链NH<,2>-D-Y-P-K-L-T-F-T-T-S.经NCBI-BLASTP分析,未找到相似序列的蛋白质.蒜头果蛋白具有强烈的人宫颈癌细胞(Hela细胞)和非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)毒性,其对热较稳定,在60℃时还表现出一定的细胞毒性,只有加热到90℃以后,才没有细胞毒性.且通过体外抑制肿瘤细胞活性测试表明,蒜头果蛋白对Hela细胞的半致死浓度特别低,其IC<,50>为1.26×10<-9>mol/L,比天花粉蛋白(TCS)的文献值(IC<,50>为7.0×10<-8>mol/L)还小,说明蒜头果蛋白具有用于免疫毒素治疗癌症的应用前景,为研制新一代的抗肿瘤药物打下了基础.
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